稻瘟病抗性基因Pi36原核表达载体构建·表达与鉴定

• 作 者: 王玲 张向明 刘新琼
• 机 构: 华南农业大学资源环境学院,中南民族大学生命科学学院生物技术国家民委重点实验室
• 出 处: 安徽农业科学
• 发表日期: 2010年21期
• 关键词: 稻瘟病 抗性基因 原核表达载体 基因克隆 Magnaporthe oryza Resistance gene Prokaryotic expression
• 基金项目: 国家转基因生物新品种培育重大专项（2009ZX08009-023B）, 国家自然科学基金青年项目（30600400）

[目的]研究稻瘟病抗性基因Pi36的结构和功能。[方法]利用双酶切构建Pi36基因CC、NBS结构域的原核表达载体,通过菌落PCR鉴定和测序验证阳性克隆。然后分别收集不同浓度IPTG诱导,不同温度30和37℃分别培养的大肠杆菌细胞提取蛋白,利用SDS-PAGE电泳检测目的蛋白的表达情况。[结果]当IPTG浓度为1mmol/L、30℃培养3h,目的蛋白表达量最大。[结论]为进一步研究稻瘟病抗性基因Pi36的抗病机理奠定基础。