【摘 要】
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利用酿酒酵母表达系统表达狂犬病病毒糖蛋白G,可获得大量无致病的抗原,为研究新型狂犬病疫苗提供条件。构建Tat-G融合基因,通过EcoR I和Xba I酶切位点克隆至pYes2表达载体中,
【机 构】
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南方医科大学基因工程研究所; 华南农业大学资源环境学院;
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利用酿酒酵母表达系统表达狂犬病病毒糖蛋白G,可获得大量无致病的抗原,为研究新型狂犬病疫苗提供条件。构建Tat-G融合基因,通过EcoR I和Xba I酶切位点克隆至pYes2表达载体中,醋酸锂法转化酿酒酵母,URA3筛选鉴定阳性克隆,阳性重组子经半乳糖诱导20 h后,提取蛋白,SDS-PAGE和Western blot分析鉴定融合蛋白。SDS-PAGE结果显示糖蛋白基因在酿酒酵母中可能表达为2种形式的蛋白,yGI和yGII,分子大小分别为66 kD和56 kD,Western blot显示在56 kD处有特异性条带。结合前人的研究成果,初步判断狂犬病病毒糖蛋白基因的跨膜TD区和膜内编码区对RV-G蛋白分子的正确折叠和免疫活性等有至关重要的影响,从而为进一步提高yGII蛋白的表达奠定基础。
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