【摘 要】
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目的建立荧光定量RT-PCR法检测白血病融合基因bcr/abl mRNA的方法,为白血病临床诊断及微量残留病监测提供有用工具.方法 RT-PCR扩增培养的K562细胞bcr/abl融合基因,A-T载体克隆法构建定量标准模板,用PE7700型检测仪,建立荧光定量RT-PCR方法,对方法的灵敏性、稳定性、重复性进行测定;定量检测14例慢性髓细胞白血病(CML)患者和4例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者
【机 构】
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510089,广州,中山大学达安基金诊断中心,中山大学肿瘤医院生物治疗科,
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目的建立荧光定量RT-PCR法检测白血病融合基因bcr/abl mRNA的方法,为白血病临床诊断及微量残留病监测提供有用工具.方法 RT-PCR扩增培养的K562细胞bcr/abl融合基因,A-T载体克隆法构建定量标准模板,用PE7700型检测仪,建立荧光定量RT-PCR方法,对方法的灵敏性、稳定性、重复性进行测定;定量检测14例慢性髓细胞白血病(CML)患者和4例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者外周血样本.结果建立的荧光定量RT-PCR方法,可检测出约10-5μg K562总RNA中的 bcr/abl融合基因和10个bcr/abl重组质粒拷贝,重复性的CT值(Cyclethreshold)管间、批间变异系数(CV)分别为:2.0%,3.7%.14例CML患者bcr/abl融合基因表达量中位数为5.15×104拷贝/μg RNA,产物经电泳分析,其中11例为b2a2,3例为b3a2,1例12×104拷贝/μgRNA的CML患者,骨髓移植后1个月变为0.23×104拷贝/μg RNA.4例ALL患者中1例有bcr/abl融合基因的表达,为b2a2,表达量为8.2×105拷贝/μg RNA.结论建立的荧光定量RT-PCR方法灵敏、特异、重复性好,结果用拷贝数表示,准确可靠,利于统一标准.该方法能检测出b2a2、b3a2两种类型的融合基因,可广泛用于CML的诊断和微量残留病的检测.
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