【摘 要】
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目的:从拟南芥叶中克隆水杨酸结合蛋白(SA binding protein 2,SABP2,也称水杨酸受体)基因sabp2进行异源表达并测定其活性。方法:从拟南芥叶RNA中通过反转录PCR扩增sabp2,将PC
【机 构】
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东南大学医学院生物工程系; 南京大学生命科学学院功能生物分子研究所;
【基金项目】
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东南大学自然科学基金预研项目(9223001408)资助
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目的:从拟南芥叶中克隆水杨酸结合蛋白(SA binding protein 2,SABP2,也称水杨酸受体)基因sabp2进行异源表达并测定其活性。方法:从拟南芥叶RNA中通过反转录PCR扩增sabp2,将PCR产物克隆至载体pMD-19T simple中,经测序验证后,再基于pET28a构建重组表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)并表达,检测重组蛋白的活性。另一方面,对sabp2在拟南芥中转录水平进行了研究。结果:PCR获得792bp的sabp2基因,并成功构建异源表达载体pET28a-sabp2。优化结果表明,在0.4mmol/L IPTG诱导下20℃培养8h,表达产物活性较强,具天然SABP2的特征性酯酶活性。该基因在拟南芥叶中转录模式呈SA应激性和组织特异性。结论:sabp2成功表达,不仅为筛选SA受体拮抗剂提供新的原核体系,而且为探讨SA与SABP2相互作用在植物防御过程中时空变化奠定基础。
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