探讨大鼠严重烧伤后心肌组织溶酶体液泡型ATP(V－ATP)酶活性变化对心肌损害的影响及其机制。
方法取12只SD大鼠心脏，采用超高速梯度密度离心法提取心肌组织溶酶体，蛋白质印迹法和透射电镜观察鉴定。将120只SD大鼠按随机数字表法分为单纯烧伤组、ATP组、正常对照组、巴佛洛霉素组，每组30只。单纯烧伤组和ATP组大鼠造成背部约40%TBSA Ⅲ度烫伤，单纯烧伤组大鼠伤后即刻腹腔注射乳酸林格液4 mL·%TBSA－1·kg－1，ATP组大鼠分别于伤前12 h、伤后即刻、伤后12 h腹腔注射ATP 0.4 mg/kg。正常对照组大鼠不行任何处理，巴佛洛霉素组与ATP组大鼠同时相点腹腔注射巴佛洛霉素A1 0.3 mg/kg。于伤后24 h，提取各组大鼠心肌组织溶酶体，采用酶偶联分析法检测V－ATP酶活性，蛋白质印迹法检测心肌自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)和P62的表达。取左心室动脉血检测心肌酶谱5项和心肌肌钙蛋白T(cTnT)的含量。对数据行单因素方差分析、t检验。
结果(1)经鉴定，样品溶酶体相关膜蛋白1表达水平最高，溶酶体纯度高、结构完整。(2)伤后24 h，单纯烧伤组、ATP组、正常对照组、巴佛洛霉素组大鼠心肌组织溶酶体V－ATP酶活性分别为(2.03±0.67)、(3.01±0.58)、(4.29±0.26)、(1.83±0.52)μmol·mg－1·h－1。其中单纯烧伤组大鼠心肌组织溶酶体V－ATP酶活性明显低于ATP组和正常对照组(t值分别为3.14和8.87，P值均小于0.01)，正常对照组大鼠心肌组织溶酶体V－ATP酶活性明显高于巴佛洛霉素组(t＝11.87，P<0.01)。伤后24 h，单纯烧伤组大鼠心肌LC3和P62的表达显著高于ATP组和正常对照组(t值为3.73～5.88，P值均小于0.01)，正常对照组大鼠心肌LC3和P62的表达明显低于巴佛洛霉素组(t值分别为2.64和3.07，P<0.05或P<0.01)。伤后24 h，单纯烧伤组大鼠心肌酶谱5项和cTnT含量明显高于ATP组和正常对照组(t值为3.24～16.72，P值均小于0.01)，正常对照组大鼠心肌酶谱5项和cTnT含量明显低于巴佛洛霉素组(t值为2.39～10.70，P值均小于0.01)。
结论大鼠严重烧伤后心肌组织溶酶体V－ATP酶活性下降，可通过抑制大鼠心肌自噬流引起心肌损害。