反转录病毒载体G1NaCⅨ的构建及其在离体细胞中的表达

• 作 者: 章红 卢大儒 江紫生 汪泱 江全 袁铿 邱信芳 薛京伦
• 机 构: 江西省医学科学研究所抗肿瘤研究室,复旦大学遗传所
• 出 处: 江西医学检验
• 发表日期: 1998年3期
• 关键词: 反转录病毒载体 细胞 小鼠 CMV 表达 HT NIH 因子 正确 片段 Clotting factor Ⅸ Retrovirus vector Gene t

目的构建高效、安全、可用于基因治疗的反转录病毒载体G1NaCⅨ。方法用限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ将CMV-FⅨ cDNA从质粒pCMVⅨ-10上切下，将该片段与BamHⅠ和Hind Ⅲ双酶切后的G1Na连接，连接后的载体经鉴定连接正确后即为新载体G1NaCⅨ，将G1NaCⅨ通过包装细胞PA317导入小鼠成纤维细胞NIH3T3、小鼠成肌细胞C2C12和人纤维肉瘤细胞HT1080中．选择培养两周后分别涮定G1NaCⅨ在上述细胞中的Ⅸ因子表达量。结果(1)经酶切电泳鉴定．G1NaCⅨ连接正确；(2)G1N