【摘 要】
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目的 建立一种温州病毒(Wenzhou virus,WENV)的SYBR GreenI实时荧光PCR检测方法.方法 分析WENV保守区域并设计特异引物,以特异扩增产物构建的阳性重组质粒为标准品,建立SYBR
【机 构】
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海南医学院热带医学与检验医学院,海南 海口,571199海南医学院热带医学与检验医学院,海南 海口 571199;海南医学院热带医学转化重点实验室,海南 海口 571199;
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目的 建立一种温州病毒(Wenzhou virus,WENV)的SYBR GreenI实时荧光PCR检测方法.方法 分析WENV保守区域并设计特异引物,以特异扩增产物构建的阳性重组质粒为标准品,建立SYBR Green I实时荧光定量PCR反应的扩增曲线和溶解曲线,获得标准曲线.结果 建立的WENV的荧光定量PCR标准曲线在1×101～1×108拷贝/μl的浓度时呈现良好线性关系,其扩增相关系数为0.999,熔解曲线只出现1个特异峰,无引物二聚体,检测下限可达10拷贝.利用WENV的样本对本检测方法进行验证,结果良好,组内变异系数为1.47％.讨论 本实验建立的SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法灵敏度高、特异性好,可用于WENV的诊断及病原的定量分析.
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