【摘 要】
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目的用乳酸菌质粒表达载体pNZ2103克隆BALB/c小鼠金属硫蛋白(MT)-1 cDNA基因.方法设计一对含有限制酶Pst1和Hind Ⅲ位点的引物.以质粒pET21a-MT为模板,采用PCR法扩增BALB/c小
【机 构】
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大连医科大学,生化教研室,辽宁,大连,116027
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目的用乳酸菌质粒表达载体pNZ2103克隆BALB/c小鼠金属硫蛋白(MT)-1 cDNA基因.方法设计一对含有限制酶Pst1和Hind Ⅲ位点的引物.以质粒pET21a-MT为模板,采用PCR法扩增BALB/c小鼠MT-1 cDNA.用限制性内切酶Pst1和Hind Ⅲ将MT-1 cDNA克隆于质粒pNZ2103形成重组质粒pNZ2103-MT.将pN2103-MT转化进入大肠埃希菌DH5α.采用PCR法和Pst1、Hind Ⅲ双酶切方法鉴定含有pNZ2103-MT的转化子.12% SDS-PAGE鉴定pNZ2103-MT在大肠埃希菌DH5α的表达水平.结果获得含有pNZ2103-MT的DH5α转化子.结论以乳酸菌质粒表达载体pNZ2103构建的pNZ2103-MT在大肠埃希菌中表达水平较低,采用SDS-PAGE难以检测到表达水平的金属硫蛋白.
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