【摘 要】
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目的 表达及纯化单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus type 1,HSV-1)糖蛋白D(glycoprotein D,gD)并制备多克隆抗体. 方法 双酶切pcDNA 3.1-HSV1-gD和pFastBacTM I质粒,gD基
【机 构】
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西南医科大学口腔医学研究所,四川泸州646000;西南医科大学基础医学院;西南医科大学基础医学院
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目的 表达及纯化单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus type 1,HSV-1)糖蛋白D(glycoprotein D,gD)并制备多克隆抗体. 方法 双酶切pcDNA 3.1-HSV1-gD和pFastBacTM I质粒,gD基因克隆到pFastBacTM I载体,连接产物转化E.coli DH10Bac感受态细胞并鉴定重组杆状病毒质粒Bacmid-gD.将构建正确的重组杆粒转染Sf9细胞包装杆状病毒.杆状病毒经传代扩增后,诱导重组gD蛋白的表达,使用Ni-NTA亲和层析及凝胶过滤层析纯化重组gD蛋白,进行15％ SDS-PAGE电泳鉴定并采用肽指纹图谱分析纯化的gD蛋白.将纯化的gD蛋白进行热稳定性试验检测其在不同缓冲液条件下的稳定性.用重组gD蛋白免疫小鼠,利用ELISA法检测血清抗体滴度. 结果 成功构建重组质粒pFastBacTM I-gD,转化E.coli DH10Bac感受态细胞后,经蓝白斑筛选鉴定重组杆状病毒质粒Bacmid-gD,鉴定正确的重组质粒感染Sf9细胞,包装出重组杆状病毒,获得滴度为8×108 pfu/ml的P3代杆状病毒.重组杆状病毒再次感染Sf9细胞能够表达高纯度可溶性的重组gD蛋白.不同缓冲液条件下重组gD蛋白稳定性良好.用gD蛋白免疫小鼠,获得ELISA效价为1×105的多克隆抗体. 结论 成功构建重组杆状病毒质粒Bacmid-gD,表达的HSV-1 gD蛋白稳定及免疫原性良好,制备的抗gD蛋白多克隆抗体滴度高,为HSV-1的亚单位疫苗的制备鉴定了基础.
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