胃癌细胞MKN-45中肿瘤转移相关基因1的泛素化修饰及对其表达的影响

• 作 者: 于快云 张好生 康丽华
• 机 构: 264001 烟台，山东省烟台市烟台山医院普外科,264001 烟台，山东省烟台市烟台山医院普外科,265400 招远，山东省招远市人民医院普外科
• 出 处: 中华实验外科杂志
• 发表日期: 2016年33期
• 关键词: 胃癌 转移相关基因1 泛素化

目的

观察胃癌细胞中转移相关基因1(MTA1)是否可被泛素化修饰及其对MTA1表达的影响。

方法

将未转染的胃癌MKN-45细胞[Myc-MTA1(－)、HA-Ub (－)]设为对照组，3个实验组MKN-45细胞分别转染入带Myc标记的MTA1质粒[Myc-MTA1(＋)、HA-Ub(－)]和带HA标记的泛素质粒[Myc-MTA1(－)、HA-U(＋)]以及共同转染入该两种质粒的胃癌MKN-45细胞[Myc-MTA1(＋)、HA-Ub(＋)]。向每个培养皿内转染2 μg质粒，培养24 h后即可收获转染细胞，以蛋白酶体抑制剂MG-132处理实验组胃癌细胞MKN-45，以免疫沉淀法、Western blot法等检测MTA1表达水平，并将带Myc标记的MTA1质粒和带HA标记的泛素(HA-Ub)质粒分别转入胃癌细胞MKN-45，设为实验组，未转染的胃癌细胞MKN-45为对照组，检测各组细胞中Myc-MTA1的表达。同时采用流式细胞仪法检测MG-132诱导各组胃癌MKN-45细胞的凋亡。

结果

(1)以蛋白酶体抑制剂MG-132处理胃癌细胞MKN-45后，MTA1表达水平显著增加；2、6 h分别为(0.78±0.15) μg/ml和(1.37±0.33) μg/ml，与对照组比较[(0.28±0.09) μg/ml]，差异有统计学意义(t＝2.134，5.562，P<0.05)。(2)免疫共沉淀实验结果显示，6 h后，实验组泛素化程度为(77.28±9.38)%, 与对照组的(15.41±2.14)%比较，实验组泛素化程度明显增加(P<0.05)。(3)在胃癌MKN-45细胞[Myc-MTA1(＋)、HA-Ub(＋)]中，可检测到Myc-MTA1可被强烈泛素化，泛素化程度为(64.59±7.61)%，与另外两组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。(3)将MKN-45细胞以siMTA1处理封闭MTA1的表达后，将Myc-MTA1质粒以及HA-Ub质粒转入该细胞，可见当后者存在时Myc-MTA1可被强烈泛素化。转染两种质粒的胃癌MKN-45细胞[Myc-MTA1(＋)、HA-Ub(＋)]凋亡数量显著多于对照组MKN-45细胞(t＝2.436，3.537，P<0.05)。(4)c-聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的水平显示MKN-45细胞[Myc-MTA1(＋)、HA-Ub(＋)]凋亡程度显著高于对照组MKN-45细胞 (t＝1.845，2.374，P<0.05)。

结论

在胃癌细胞中，MTA1是可被泛素化途径修饰的蛋白，其泛素化途径在胃癌的发展与转移中发挥重要作用。