【摘 要】
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目的 探讨不同浓度的胰升血糖素(Gig)在无糖、低糖、高糖的环境下通过环磷酸腺苷(cAMP)信号通路对胰岛素分泌的直接调控作用及机制,基于荧光共振能量转移(FRET)的生物传感器
【机 构】
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832000,石河子大学医学院第一附属医院内分泌代谢科;石河子大学医学院;郑州市第一人民医院神经科重症监护室;
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目的 探讨不同浓度的胰升血糖素(Gig)在无糖、低糖、高糖的环境下通过环磷酸腺苷(cAMP)信号通路对胰岛素分泌的直接调控作用及机制,基于荧光共振能量转移(FRET)的生物传感器技术可作为一种用来在活细胞上实时定量检测第二信使cAMP水平的方法.方法 体外培养MIN6细胞,在葡萄糖0、2.8、16.7 mmol/L下予Glg 0、100、500、1000 ng/L干预处理,ELISA检测不同处理下MIN6胞内cAMP量和胰岛素释放量;电转染法将质粒ICUE3转染进入MIN6细胞,用FRET技术检测细胞内cAMP水平.结果 ELISA与FRET技术检测的cAMP含量结果基本相同,印证了FRET检测cAMP的可行性;无糖、低糖及高糖环境下,cAMP含量及胰岛素的分泌量为1000 ng/L组高于500、100、0 ng/L组,500 ng/L组高于100 ng/L和0 ng/L组;在低糖及高糖环境下,100 ng/L组高于0 ng/L组(P＜o.05),且葡萄糖浓度越高趋势越明显.Pearson相关性分析结果显示,MIN6细胞内cAMP含量与胰岛素分泌量呈正相关(R2 =0.559,P＜0.01).结论 基于FRET的生物传感器技术可以作为一种用来在活细胞上实时定量检测第二信使cAMP水平的方法.Glg可能以浓度梯度的形式通过上调胰岛β细胞胞内cAMP浓度来促进Ins分泌,有一定的葡萄糖依赖性.
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