【摘 要】
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目的在毕赤酵母中高效分泌表达与天然人载脂蛋白A-Ⅱ具有相同结构和活性的重组人载脂蛋白A-Ⅱ(rhApoA-Ⅱ)。方法通过逆转录聚合酶链反应(PCR)法从人肝组织钓取编码人ApoA-Ⅱ的cDNA，将其与pPICZα载体连接，构建真核分泌型重组质粒。重组质粒人ApoA-Ⅱ-pPICZα经过Sac Ⅰ酶切线性化，然后转化毕赤酵母感受态细胞。经过酵母基因组鉴定，筛选重组工程菌，建立rhApoA-Ⅱ的毕赤酵
【机 构】
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130021 长春，吉林省人民医院内分泌科,130041 长春，吉林大学第二医院妇产科,132013 吉林省吉林市，吉林康乃尔药业有限公司质量部,130021 长春，吉林大学药学院,130021 长春
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目的在毕赤酵母中高效分泌表达与天然人载脂蛋白A-Ⅱ具有相同结构和活性的重组人载脂蛋白A-Ⅱ(rhApoA-Ⅱ)。
方法通过逆转录聚合酶链反应(PCR)法从人肝组织钓取编码人ApoA-Ⅱ的cDNA，将其与pPICZα载体连接，构建真核分泌型重组质粒。重组质粒人ApoA-Ⅱ-pPICZα经过Sac Ⅰ酶切线性化，然后转化毕赤酵母感受态细胞。经过酵母基因组鉴定，筛选重组工程菌，建立rhApoA-Ⅱ的毕赤酵母分泌表达体系，对rhApoA-Ⅱ进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹实验(Western blot)分析。
结果经PCR法克隆的人ApoA-Ⅱ cDNA序列与GenBank登录序列一致。还原电泳条件下，SDS-PAGE和Western blot分析均在分子量约8 700处出现特异性条带。
结论成功构建了人ApoA-Ⅱ-pPICZα表达载体，在毕赤酵母菌中高效分泌表达rhApoA-Ⅱ，为进一步研究其结构与功能提供了物质基础。
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