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【摘 要】固定相为：TSK·GELG2000SWXL色谱柱（7.8mm×300mm，5μm），0.06mol/L磷酸盐缓冲液（0.06mol/L磷酸氢二铵溶液，用磷酸调节pH值7.0）-乙腈（95：5）流动相，检测波长为280nm；头孢呋辛酯浓度在0.3～1.5mg/mL范围内内呈良好的线性关系。本法简便、重现性好，可用于头孢呋辛酯中高分子聚合物的含量测定。
【关键词】头孢呋辛酯；高分子聚合物；测定
头孢呋辛酯为（6R，7R）-7-2-呋喃基（甲氧亚氨基）乙酰氨基-3-氨基甲酰氧甲基-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环4辛-2-烯-2-羧酸，1-乙酰氧基乙酯[1-4]。头孢呋辛酯在体内水解后释出头孢呋辛而发挥其抗菌活性，对革兰阴性菌如淋球菌、奇异变形杆菌、流感杆菌、卡他摩拉菌和大肠杆菌科等均有抑制作用[5-7]。头孢呋辛酯适用于溶血性链球菌、流感嗜血杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌等肠杆菌科细菌敏感菌株所致成人急性咽炎或扁桃体炎、急性中耳炎、急性支气管炎、单纯性尿路感染、皮肤软组织感染及无并发症淋病奈瑟菌性尿道炎和宫颈炎。本文用高效液相法对头孢呋辛酯中的高分子聚合物的进行了含量测定。
1.仪器与试药
DL-820E超声波清洗机（上海高创化学科技有限公司）； ABS 220-4分析天平（德祥科技有限公司）；RE-5220旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；AT-830制冷、加热两用色谱柱温箱（杭州瑞析科技有限公司）；XYJ-H帕恩特实验室中央超纯水系统（北京湘顺源科技有限公司）；SHB-III型台式循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；LC3100高效液相色谱仪（安徽皖仪科技股份有限公司）；UV-1800紫外/可见分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）。
磷酸（湖北兴银河化工有限公司）、醋酸（湖北兴银河化工有限公司）、甲醇（徐州赛福化工有限公司）、冰乙酸（杭州米克化工仪器有限公司）、乙腈（广州振威化工科技有限公司）、磷酸氢二铵（张家港雅瑞化工有限公司）、醋酸铵（济南乐奇化工有限公司）、盐酸（广州花之王化工有限公司）。
2.含量测定
2.1色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[8-12]。色谱柱为TSK·GELG2000SWXL色谱柱（7.8mm×300mm，5μm）；0.06mol/L磷酸盐缓冲液（ 0.06mol/L磷酸氢二铵溶液， 用磷酸调节pH 值7.0）-乙腈（ 95：5）为流动相；检测波长为280nm；流速0.5mL·min-1；柱温：30℃。理论板数按头孢呋辛酯峰计算应不得低于2000。
2.2供试品溶液的制备
取头孢呋辛酯适量，研细，精密称定至容量瓶内，加流动相适量超声溶解，放凉，流动相定容，过0.45μm的滤膜，即得。
2.3对照品溶液的制备
精密称取头孢呋辛酯对照品适量，置5毫升棕色容量瓶中，用流动相超声波振荡溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.4阴性干扰试验
分别精密吸取头孢呋辛酯对照品溶液、供试品样品溶液、和高温、光照、酸碱和氧化的强制降解样品溶液各10μL注入液相色谱仪，按“2.1色谱条件”下方法进行分析，记录色谱图。结果在该色谱条件下所有强制的条件下降解产物与头孢呋辛酯的峰相同保留时间处不存在吸收峰，说明此方法具有较强的专属性。
2.5标准曲线的制备
精密称定头孢呋辛酯对照品15mg置10ml量瓶中加流动相定容.再分别量取1，2，3，4，5mL置5ml量瓶中，加入流动相稀释至刻度，分别精密上述溶液10μL注入液相色谱仪，记录色谱，以对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。试验表明，头孢呋辛酯对照品在0.3～1.5mg/mL范围内内呈良好的线性关系。
2.6精密度试验
精密吸取头孢呋辛酯对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.59%。结果表明，本实验精密度良好。
2.7重现性试验
分别称取同批头孢呋辛酯样品6份，分别制备成供试品，按色谱条件测定高分子聚合物含量，并计算样品的RSD值为0.98%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.8稳定性试验
取供试品溶液和对照品溶液，分别在0，0.5，1，2，3，4h精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，对照品峰面积积分值的RSD为0.53%。结果表明对照品至少在4h内稳定。供试品溶液在常温下2h后各个时间点其高分子聚合物杂质的含量都在明显地增加，表明供试液在常温下不稳定，须临用前现配。
2.9样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定头孢呋辛酯三批样品中高分子聚合物的含量，结果三批样品的含量分别0.86%、0.85%、0.86%。
3.讨论
药物不良反应（adverse drug reactions，简称ADR）系指正常剂量的药物用于预防、诊断、治疗疾病或调节生理机能时出现的有害的和与用药目的无关的反应。高分子聚合物是引发不良反应的主要成分之一[8-12]。分别考察醋酸盐的缓冲溶液（pH3.5）-乙腈（90∶10），0.06mol/L磷酸盐缓冲液（0.06mol/L磷酸氢二铵溶液，用磷酸调节pH 值7.0）-乙腈（85：15），0.06mol/L磷酸盐缓冲液（0.06mol/L磷酸氢二铵溶液，用磷酸调节pH 值7.0）-乙腈（95：5），0.2mol/L磷酸（用氨水调pH至6.0）-乙腈（95：5），磷酸盐缓冲液（0.01mol/L磷酸氢二铵溶液， 用磷酸调节pH 值7.0）-乙腈（90：10）不同比例的流动相，结果0.06mol/L磷酸盐缓冲液（0.06mol/L磷酸氢二铵溶液， 用磷酸调节pH值7.0）-乙腈（ 95：5）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用0.06mol/L磷酸盐缓冲液（0.06mol/L磷酸氢二铵溶液，用磷酸调节pH 值7.0）-乙腈（95：5）为流动相。本实验方法是一种简便、准确、安全的测定头孢呋辛酯中高分子聚合物的含量。 [科]
【参考文献】
[1]刘浩，王红武，仇仕林.头孢呋辛酯HPLC含量测定方法的改进[J].中国抗生素杂志，2003（11）.
[2]张玫，殷璐.HPLC法测定头孢呋辛酯及其片剂的含量[J].江苏药学与临床研究，2000（04）.
[3]苏茵.关于中国药典2000年版中头孢呋辛酯相关物质检查限度的商讨[J].广东药学院学报，2001（03）.
[4]高晨，赵志刚，李晔，杨骁潇，李冬梅，魏建涛，王景田，余立，庞青云，王成刚.头孢呋辛酯分散片人体生物等效性[J].中国临床药理学杂志，2002（06）. [5]黎泽生，黎毅敏，杨冬阳.头孢呋辛酯治疗下呼吸道感染32例临床观察[J].广东药学，1998（03）.
[6]赵甘霖，张强，孙华东，张大卫，吕万良.头孢呋辛酯干混悬剂人体相对生物利用度研究[J].中国药学杂志，2001（09）.
[7]殷凯生，吴振国，黄建安，戴玲娟，张苗，陶岳多，李淑云，葛京平.国产与进口头孢呋辛酯片的对照性临床研究[J].中国临床药理学杂志，1999（06）.
[8]陈冠容.头孢菌素类抗生素过敏反应与产品质量的关系[J].中国医院药学杂志，2009（01）.
[9]胡昌勤.抗菌药中高分子杂质的特性及抗菌药过敏反应（下）[J].中国药师，2006（04）.
[10]胡昌勤.抗菌药中高分子杂质的特性及抗菌药过敏反应（上）[J].中国药师，2006（03）.
[11]袁雯玮.高分子聚合物研究与中国药典2005年版β-内酰胺类抗生素高分子聚合物修订情况及操作要点[J].中国抗生素杂志，2005（12）.
[12]金少鸿，经洁，郑昌亮.头孢噻肟中高分子杂质和过敏反应关系的研究Ⅱ.头孢噻肟中高分子过敏性杂质的本质探讨[J].抗生素，1986（06）.
【关键词】头孢呋辛酯；高分子聚合物；测定
头孢呋辛酯为（6R，7R）-7-2-呋喃基（甲氧亚氨基）乙酰氨基-3-氨基甲酰氧甲基-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环4辛-2-烯-2-羧酸，1-乙酰氧基乙酯[1-4]。头孢呋辛酯在体内水解后释出头孢呋辛而发挥其抗菌活性，对革兰阴性菌如淋球菌、奇异变形杆菌、流感杆菌、卡他摩拉菌和大肠杆菌科等均有抑制作用[5-7]。头孢呋辛酯适用于溶血性链球菌、流感嗜血杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌等肠杆菌科细菌敏感菌株所致成人急性咽炎或扁桃体炎、急性中耳炎、急性支气管炎、单纯性尿路感染、皮肤软组织感染及无并发症淋病奈瑟菌性尿道炎和宫颈炎。本文用高效液相法对头孢呋辛酯中的高分子聚合物的进行了含量测定。
1.仪器与试药
DL-820E超声波清洗机（上海高创化学科技有限公司）； ABS 220-4分析天平（德祥科技有限公司）；RE-5220旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；AT-830制冷、加热两用色谱柱温箱（杭州瑞析科技有限公司）；XYJ-H帕恩特实验室中央超纯水系统（北京湘顺源科技有限公司）；SHB-III型台式循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；LC3100高效液相色谱仪（安徽皖仪科技股份有限公司）；UV-1800紫外/可见分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）。
磷酸（湖北兴银河化工有限公司）、醋酸（湖北兴银河化工有限公司）、甲醇（徐州赛福化工有限公司）、冰乙酸（杭州米克化工仪器有限公司）、乙腈（广州振威化工科技有限公司）、磷酸氢二铵（张家港雅瑞化工有限公司）、醋酸铵（济南乐奇化工有限公司）、盐酸（广州花之王化工有限公司）。
2.含量测定
2.1色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[8-12]。色谱柱为TSK·GELG2000SWXL色谱柱（7.8mm×300mm，5μm）；0.06mol/L磷酸盐缓冲液（ 0.06mol/L磷酸氢二铵溶液， 用磷酸调节pH 值7.0）-乙腈（ 95：5）为流动相；检测波长为280nm；流速0.5mL·min-1；柱温：30℃。理论板数按头孢呋辛酯峰计算应不得低于2000。
2.2供试品溶液的制备
取头孢呋辛酯适量，研细，精密称定至容量瓶内，加流动相适量超声溶解，放凉，流动相定容，过0.45μm的滤膜，即得。
2.3对照品溶液的制备
精密称取头孢呋辛酯对照品适量，置5毫升棕色容量瓶中，用流动相超声波振荡溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.4阴性干扰试验
分别精密吸取头孢呋辛酯对照品溶液、供试品样品溶液、和高温、光照、酸碱和氧化的强制降解样品溶液各10μL注入液相色谱仪，按“2.1色谱条件”下方法进行分析，记录色谱图。结果在该色谱条件下所有强制的条件下降解产物与头孢呋辛酯的峰相同保留时间处不存在吸收峰，说明此方法具有较强的专属性。
2.5标准曲线的制备
精密称定头孢呋辛酯对照品15mg置10ml量瓶中加流动相定容.再分别量取1，2，3，4，5mL置5ml量瓶中，加入流动相稀释至刻度，分别精密上述溶液10μL注入液相色谱仪，记录色谱，以对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。试验表明，头孢呋辛酯对照品在0.3～1.5mg/mL范围内内呈良好的线性关系。
2.6精密度试验
精密吸取头孢呋辛酯对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.59%。结果表明，本实验精密度良好。
2.7重现性试验
分别称取同批头孢呋辛酯样品6份，分别制备成供试品，按色谱条件测定高分子聚合物含量，并计算样品的RSD值为0.98%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.8稳定性试验
取供试品溶液和对照品溶液，分别在0，0.5，1，2，3，4h精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，对照品峰面积积分值的RSD为0.53%。结果表明对照品至少在4h内稳定。供试品溶液在常温下2h后各个时间点其高分子聚合物杂质的含量都在明显地增加，表明供试液在常温下不稳定，须临用前现配。
2.9样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定头孢呋辛酯三批样品中高分子聚合物的含量，结果三批样品的含量分别0.86%、0.85%、0.86%。
3.讨论
药物不良反应（adverse drug reactions，简称ADR）系指正常剂量的药物用于预防、诊断、治疗疾病或调节生理机能时出现的有害的和与用药目的无关的反应。高分子聚合物是引发不良反应的主要成分之一[8-12]。分别考察醋酸盐的缓冲溶液（pH3.5）-乙腈（90∶10），0.06mol/L磷酸盐缓冲液（0.06mol/L磷酸氢二铵溶液，用磷酸调节pH 值7.0）-乙腈（85：15），0.06mol/L磷酸盐缓冲液（0.06mol/L磷酸氢二铵溶液，用磷酸调节pH 值7.0）-乙腈（95：5），0.2mol/L磷酸（用氨水调pH至6.0）-乙腈（95：5），磷酸盐缓冲液（0.01mol/L磷酸氢二铵溶液， 用磷酸调节pH 值7.0）-乙腈（90：10）不同比例的流动相，结果0.06mol/L磷酸盐缓冲液（0.06mol/L磷酸氢二铵溶液， 用磷酸调节pH值7.0）-乙腈（ 95：5）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用0.06mol/L磷酸盐缓冲液（0.06mol/L磷酸氢二铵溶液，用磷酸调节pH 值7.0）-乙腈（95：5）为流动相。本实验方法是一种简便、准确、安全的测定头孢呋辛酯中高分子聚合物的含量。 [科]
【参考文献】
[1]刘浩，王红武，仇仕林.头孢呋辛酯HPLC含量测定方法的改进[J].中国抗生素杂志，2003（11）.
[2]张玫，殷璐.HPLC法测定头孢呋辛酯及其片剂的含量[J].江苏药学与临床研究，2000（04）.
[3]苏茵.关于中国药典2000年版中头孢呋辛酯相关物质检查限度的商讨[J].广东药学院学报，2001（03）.
[4]高晨，赵志刚，李晔，杨骁潇，李冬梅，魏建涛，王景田，余立，庞青云，王成刚.头孢呋辛酯分散片人体生物等效性[J].中国临床药理学杂志，2002（06）. [5]黎泽生，黎毅敏，杨冬阳.头孢呋辛酯治疗下呼吸道感染32例临床观察[J].广东药学，1998（03）.
[6]赵甘霖，张强，孙华东，张大卫，吕万良.头孢呋辛酯干混悬剂人体相对生物利用度研究[J].中国药学杂志，2001（09）.
[7]殷凯生，吴振国，黄建安，戴玲娟，张苗，陶岳多，李淑云，葛京平.国产与进口头孢呋辛酯片的对照性临床研究[J].中国临床药理学杂志，1999（06）.
[8]陈冠容.头孢菌素类抗生素过敏反应与产品质量的关系[J].中国医院药学杂志，2009（01）.
[9]胡昌勤.抗菌药中高分子杂质的特性及抗菌药过敏反应（下）[J].中国药师，2006（04）.
[10]胡昌勤.抗菌药中高分子杂质的特性及抗菌药过敏反应（上）[J].中国药师，2006（03）.
[11]袁雯玮.高分子聚合物研究与中国药典2005年版β-内酰胺类抗生素高分子聚合物修订情况及操作要点[J].中国抗生素杂志，2005（12）.
[12]金少鸿，经洁，郑昌亮.头孢噻肟中高分子杂质和过敏反应关系的研究Ⅱ.头孢噻肟中高分子过敏性杂质的本质探讨[J].抗生素，1986（06）.