【摘 要】
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目的 应用同位素标记的绝对与相对定量(iTRAQ)蛋白质组学技术联合Q-Exactive质谱仪对罗布麻总黄酮(total flavonoids of Folium Apocyni Venet,TFF)作用前后EA.hy926细胞的蛋白质表达谱进行检测,找出差异蛋白,并对其进行生物信息学分析,以探讨TFF抑制H2O2诱导的EA.hy926细胞损伤的作用机制.方法 (1)采用MTT法检测TFF各浓度的
【机 构】
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山西省中医药研究院,山西太原030012
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目的 应用同位素标记的绝对与相对定量(iTRAQ)蛋白质组学技术联合Q-Exactive质谱仪对罗布麻总黄酮(total flavonoids of Folium Apocyni Venet,TFF)作用前后EA.hy926细胞的蛋白质表达谱进行检测,找出差异蛋白,并对其进行生物信息学分析,以探讨TFF抑制H2O2诱导的EA.hy926细胞损伤的作用机制.方法 (1)采用MTT法检测TFF各浓度的细胞毒性和最有效剂量.(2)分别提取正常组,模型组,罗布麻总黄酮组蛋白,酶解后用不同的iTRAQ试剂标记,混合后采用Q-Exactive质谱仪鉴定,并用PD(Proteome Discoverer 1.3,thermo)和mascot 2.3.0进行定性和定量分析,筛选差异表达蛋白并对其进行生物信息学分析.结果 (1)36 mg· L-1的TFF能较好的减少H2O2导致的细胞凋亡.(2)实验共鉴定出蛋白3628个,以两组比值≥1.2或≤0.8为差异蛋白定量标准,H2O2刺激后导致其中250个蛋白表达发生变化(两组比值＞1.2倍或＜0.8倍),经TFF治疗可改善87个蛋白的异常表达趋势,其中上调54个,下调33个,包括血红蛋白δ亚基(HBD),硫氧还蛋白结构域蛋白15(TXD15),溶质载体家族12成员6(S12A6),组织因子途径抑制物(TFPI),血小板衍化生长因子β(PA1B2)等蛋白.结论 TFF能改变H2O2导致的差异蛋白表达情况,这些蛋白富集于细胞周期,细胞骨架,细胞凋亡等多种生物学功能,形成庞大的相互作用网络,协同发挥抗凋亡作用.
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