【摘 要】
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目的 扩增杜氏利什曼原虫假定蛋白PA5基因,原核表达该假定蛋白并预测其结构与功能.方法 以杜氏利什曼原虫前鞭毛体基因组DNA为模板,巢式PCR法扩增该基因,将其克隆入pQE30质粒
【机 构】
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川北医学院第二临床医学院检验科,四川南充,637000;川北医学院分子生物学与免疫学研究所,四川南充,637000
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目的 扩增杜氏利什曼原虫假定蛋白PA5基因,原核表达该假定蛋白并预测其结构与功能.方法 以杜氏利什曼原虫前鞭毛体基因组DNA为模板,巢式PCR法扩增该基因,将其克隆入pQE30质粒构建pQE30?PA5重组质粒,经IPTG诱导表达目的蛋白.采用生物信息学方法对该蛋白进行同源性分析、信号肽及跨膜区预测、蛋白质结构与B细胞抗原肽位点分析.结果 成功扩增出PA5基因,序列全长为765 bp,构建的pQE30?PA5重组质粒,经诱导后目的蛋白以包涵体形式表达.所获得的蛋白含254个氨基酸,相对分子质量为27065,等电点为5.71的亲水性不稳定蛋白,不含信号肽及跨膜区.二级结构以α?螺旋及不规则卷曲为主,共含5个B细胞抗原肽片段.结论 成功表达了杜氏利什曼原虫PA5蛋白,该亲水蛋白具有体液免疫刺激潜能,具有利什曼病潜在免疫诊断价值.
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