【摘 要】
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目的 构建蛋白转导域(PTD)与扩增链亲和素( Strep)融合蛋白,用于转染常规操作中难于转染生物大分子的血液肿瘤细胞、神经细胞、干细胞等细胞系.方法 采用聚合酶链反应( PCR)
【机 构】
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中国医学科学院 北京协和医学院 血液学研究所 实验血液学国家重点实验室, 天津,300020卫生部北京医院 卫生部临检中心血液室;卫生部北京医院检验科;
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目的 构建蛋白转导域(PTD)与扩增链亲和素( Strep)融合蛋白,用于转染常规操作中难于转染生物大分子的血液肿瘤细胞、神经细胞、干细胞等细胞系.方法 采用聚合酶链反应( PCR)法引入PTD和G4S序列、扩增Strep序列；经酶切、连接构建重组质粒pAYZ-PTD-Strep,用低磷培养液AP5诱导表达融合蛋白,E-tag亲和层析柱纯化产物,Western blot鉴定产物,利用pAYZ-PTD-Strep将eGFP质粒转染到悬浮U937细胞内,流式细胞术测定融合蛋白转染效率.结果 目的产物PTD-G4S-Strep融合蛋白以可溶形式表达,产量约为0.7 mg/L,经E-tag亲和层析柱纯化后纯度可达90％以上.融合蛋白PTD-Strep可成功将质粒运送至悬浮细胞U937内,转染效率高于PTD单体.结论 构建的融合蛋白PTD-Strep具有将生物大分子转入血液肿瘤悬浮细胞内的活性,有望发展成为一种高效、可靠的真核细胞转染方法.
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