【摘 要】
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为了探讨双自杀基因慢病毒转移载体系统对K5 6 2细胞的杀伤作用 ,采用分子生物学方法构建了含大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶 (E .coliCD)和单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV TK)的双自杀基
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为了探讨双自杀基因慢病毒转移载体系统对K5 6 2细胞的杀伤作用 ,采用分子生物学方法构建了含大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶 (E .coliCD)和单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV TK)的双自杀基因慢病毒转移载体 ,将慢病毒基因转移系统中的 3种成分质粒 (目的基因转移载体、包装结构及包膜结构质粒 )用脂质体分为 2组 (实验组、对照组 )共转染入病毒包装细胞 2 93T ,在荧光显微镜下观察转染效果 ,在透射电镜下观察上清中的病毒颗粒。大量收集病毒上清 ,浓缩后感染K5 6 2细胞 ,荧光显微镜下观察感染效果 ,RT PCR鉴定目的基因在K5 6 2细胞中的整合转录。给予前体药物 5 氟胞嘧啶 (5 FC)和 (或 )无环鸟苷 (GCV)后 ,用MTT法测定体外杀伤效应 ,扫描电镜下观察使用前体药物后K5 6 2细胞的变化。结果表明 :成功构建了双自杀基因慢病毒转移载体 ,脂质体法可有效将上述慢病毒表达质粒转入 2 93T细胞。荧光显微镜下观察到对照组大量绿色荧光蛋白 (greenfluorescenceprotein ,GFP)表达。透射电镜下观察到大量浓缩后病毒颗粒。荧光显微镜下观察到此基因转移载体系统对 2 93T细胞及K5 6 2细胞的感染率均很高 ,单独使用GCV或 5 FC对转染自杀基因的K5 6 2细胞的生长抑制率 (growthinhibitionration ,GIR)分别为 4 8.73%、5 0 .16 % ,与?
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