【摘 要】
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目的 :探索富含GCDNA的PCR扩增条件 ,为大环内酯类化合物组合生物合成中模块和酶域的任意组合奠定基础。方法 :在PCR扩增体系中 ,添加甲酰胺、甘油、二甲亚砜 (DMSO)、Mg2 +
【机 构】
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军事医学科学院生物工程研究所; 军事医学科学院生物工程研究所 北京100850; 安徽大学生命科学学院; 合肥230039; 北京100850; 北京
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目的 :探索富含GCDNA的PCR扩增条件 ,为大环内酯类化合物组合生物合成中模块和酶域的任意组合奠定基础。方法 :在PCR扩增体系中 ,添加甲酰胺、甘油、二甲亚砜 (DMSO)、Mg2 + 等增强剂 ,并选择合适的扩增体系 ,优化富含GCDNAPCR扩增条件。结果 :甲酰胺对富含GCDNAPCR扩增没有影响 ,而甘油和DMSO均可提高富含GCDNAPCR产物的特异性和产率 ,以 5 %～ 10 %DMSO效果最好。使用Roche长片段DNA扩增系统 ,在使用缓冲液 2反应体系中添加 10 %DMSO和提高 0 .2 5mmol LMg2 + 浓度时 ,可以扩增长度为 5kb、GC含量为 73%的DNA片段。结论 :应用优化的PCR扩增条件 ,可以扩增长达 5kb富含GC的DNA片段 ,可以满足大环内酯类组合生物合成模块和酶域随意组合的需求
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