扬奇青霉α-半乳糖苷酶agl1基因在大肠杆菌中的表达与纯化研究

• 作 者: 张波 陈轶群 李志民 李一航 曹云鹤
• 机 构: 中国农业大学动物科技学院
• 出 处: 中国畜牧杂志
• 发表日期: 2009年23期
• 关键词: 扬奇青霉 Α-半乳糖苷酶 基因表达 蛋白纯化 Penicilliumjanczewskii Zaleski α-galactosidase gene exp
• 基金项目: 动物营养学国家重点实验室自主研究课题（2004DA125184（团）0806）,教育部新世纪优秀人才支持计划（NCET-07-0807）

提取扬奇青霉总RNA，反转录合成cDNA，PCR扩增α-半乳糖苷酶agl1基因的编码区DNA序列，连接到原核表达载体pET28a（＋）的多克隆位点，获得重组表达载体，转化大肠杆菌BL21，通过IPTG诱导获得agl1基因的特异性表达。结果表明：8mol／L尿素变性处理后的重组蛋白，经过Ni^2＋亲和柱纯化，SDS—PAGE检测该重组蛋白分子量约82ku，与预测结果相符。纯化的酶蛋白依次经过6、4、2mol／L和0mol／L尿素梯度透析复性后，α-半乳糖苷酶酶活为0．4U／mL。