【摘 要】
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目的探讨Ⅰ型11β羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD1)在肿瘤坏死因子-α(TNFα)诱导的胰岛素抵抗中的作用机制。 方法筛选适宜浓度和时间的TNFα处理HepG2细胞，分别用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)技术分析TNFα对11β-HSD1，糖皮质激素受体(GR)，磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)和葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)mRNA和蛋白
【机 构】
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100730 北京医院 卫生部北京老年医学研究所 卫生部老年医学重点实验室,100730 国家老年医学中心基础研究部,100730 北京医院 卫生部北京老年医学研究所 卫生部老年医学重点实验室,100
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目的探讨Ⅰ型11β羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD1)在肿瘤坏死因子-α(TNFα)诱导的胰岛素抵抗中的作用机制。
方法筛选适宜浓度和时间的TNFα处理HepG2细胞，分别用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)技术分析TNFα对11β-HSD1，糖皮质激素受体(GR)，磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)和葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)mRNA和蛋白表达的影响；用葡萄糖检测试剂盒检测糖异生的水平，肌/肝糖原检试剂盒和高碘酸-希夫(PAS)染色法检测细胞糖原合成的水平；分析AKT/GSK胰岛素信号通路的表达；并用11β-HSD1特异性抑制剂BVT2733预处理HepG2细胞，检测AKT/GSK信号通路、糖异生和糖原水平。
结果从0 μg/L到20 μg/L随着TNFα处理浓度的升高11β-HSD1表达增加，并呈剂量依赖效应。在10 μg/L TNFα处理24 h这一条件处理下，GR表达升高，糖异生水平升高，其相关基因PEPCK、G6Pase也表达升高；p-AKT，p-GSK水平降低，糖原合成水平降低。11β-HSD1特异性抑制剂BVT2733预处理HepG2细胞后逆转了上述TNFα的作用。
结论在HepG2细胞中，11β-HSD1参与了TNFα诱导的胰岛素抵抗，其抑制剂可以显著提高胰岛素敏感性。
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