【摘 要】
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目的 构建表达长效胰高血糖素样肽1 (glucagon-1ike peptide 1,GLP-1)受体激动剂重组Exendin-4-GLP-1/IgG4 (Fc)融合蛋白的质粒载体,并研究该融合蛋白的活性.方法 将编码Exen
【机 构】
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201210,上海汉骄生物科技有限公司
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目的 构建表达长效胰高血糖素样肽1 (glucagon-1ike peptide 1,GLP-1)受体激动剂重组Exendin-4-GLP-1/IgG4 (Fc)融合蛋白的质粒载体,并研究该融合蛋白的活性.方法 将编码Exendin-4-GLP-1/IgG4(Fc)的重组基因插入表达载体pOptiVECTM-TOPO(R)来构建重组质粒Exendin-4-GLP-1/IgG4(Fc)-pOptiVECTM-TOPO(R).将构建的重组质粒转染CHO/DG44细胞并收获表达产物后,分别用亲和层析法和免疫印迹法对表达产物进行纯化和检测.通过胰岛素释放实验确认重组融合蛋白对INS-1细胞胰岛素分泌的影响,同时在CD1小鼠中研究该融合蛋白对血糖的调节作用.结果 转染重组质粒的CHO/DG44细胞可成功表达Exendin-4-GLP-1/IgG4 (Fc).蛋白质印迹法检测显示,纯化的表达产物的相对分子质量(Mr)与预期相符(重组融合蛋白单体和二聚体的Mr分别约为35 000和70 000).胰岛素释放实验表明,在葡萄糖浓度恒定的情况下INS-1细胞分泌的胰岛素量随重组融合蛋白浓度的升高而增加.CD1小鼠实验显示,重组融合蛋白对链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠的血糖具有调节作用,Exendin-4-GLP-1/IgG4(Fc)处理的糖尿病小鼠的血糖明显低于对照糖尿病小鼠(F=3 194,P＜0.01).结论 Exendin-4-GLP-1/IgG4(Fc)具有天然GLP-1的活性,可作为GLP-1受体激动剂用于2型糖尿病的治疗.
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