【摘 要】
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目的将跨膜型抗CD3单链抗体(antiCD3scfv)特异性修饰于肝癌细胞膜表面,观察其介导淋巴细胞体外特异性杀伤AFP阳性(AFP~+)肝癌细胞的活性。方法培养AFP~+人肝癌细胞Hep G2、Hu
【机 构】
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中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所; 国家儿童医学中心首都医科大学附属北京儿童医院北京市儿科研究所;
【基金项目】
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北京市教育委员会科技计划一般项目(KM201910025011);北京市医院管理中心“青苗”计划专项(QML20181205);天津市自然科学基金项目(19JCZDJC33100)
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目的将跨膜型抗CD3单链抗体(antiCD3scfv)特异性修饰于肝癌细胞膜表面,观察其介导淋巴细胞体外特异性杀伤AFP阳性(AFP~+)肝癌细胞的活性。方法培养AFP~+人肝癌细胞Hep G2、Huh-7和AFP阴性(AFP~-)正常人肝细胞HL-7702、人乳腺癌细胞MCF-7,以正常人外周血单个核细胞(PBMC)作为效应细胞;取Hep G2细胞,分别感染含人AFP启动子(hAFPp)操控CD3scfv的腺病毒(AdCD3scfv)、Ad Track对照腺病毒,加入PBMC,分别采用显微镜、活细胞工作站监测Hep G2靶细胞与PBMC结合情况和相互作用;取Hep G2、Huh-7、HL-7702和MCF-7细胞,分别感染Ad CD3scfv、Ad Track及PBS,加入PBMC,采用Cyto To X96非放射性细胞毒方法定量检测淋巴细胞对不同靶细胞的杀伤水平,流式细胞仪检测PBMC活化表面标志分子CD69、CD25,ELISA法检测免疫细胞因子IL-2、TNF-α、IFN-γ。结果感染Ad CD3scfv的Hep G2细胞表面表达anti CD3scfv分子并与PBMC表面CD3分子结合,使PBMC聚集于Hep G2细胞周围,15 h后几乎所有Hep G2细胞漂起或消失;感染Ad Track的Hep G2细胞不与PBMC结合,形态无明显变化。与PBMC共培养12 h,与感染Ad Track、PBS的AFP~+细胞比较,感染AdCD3scfv的细胞死亡率增高,细胞中CD69、CD25及上清液IL-2、IFN-γ、TNF-α表达增加(P均<0.05);感染Ad Track、PBS的各类细胞上述指标均无明显变化,且PBMC对AFP~-细胞的杀伤作用有限。结论跨膜型anti CD3scfv分子可绕过抗原表达或主要组织相容性抗原的局限,直接介导淋巴细胞特异性杀伤AFP~+肝癌细胞。
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