【摘 要】
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目的 探讨STAT5a/b基因沉默对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠T细胞增殖功能的影响.方法 将20只雌性BALB/c小鼠按随机数字法分为正常组和哮喘组,哮喘组按处理因素不同分别分为空白
【机 构】
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暨南大学第二临床医学院呼吸内科,暨南大学第二临床医学院中心实验室
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目的 探讨STAT5a/b基因沉默对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠T细胞增殖功能的影响.方法 将20只雌性BALB/c小鼠按随机数字法分为正常组和哮喘组,哮喘组按处理因素不同分别分为空白对照组、STAT5a沉默组、STAF5b沉默组及错义链对照组,采用免疫磁珠法筛选出正常及哮喘模型小鼠的脾脏T细胞,利用RNA干扰(RNAi)沉默T细胞内STAT5a/b基因.荧光定量PCR检测STAT5a/b基因沉默前后STAT5a/b的mRNA表达变化；蛋白免疫印迹法检测STAT5a/b基因沉默前后的蛋白含量的变化；CCK-8检测T细胞RNA干扰前后增殖率的变化；流式技术检测T细胞RNA干扰前后细胞增殖周期及早期凋亡率的变化.结果 (1)哮喘小鼠气道病理结果显示明显炎症改变.(2)哮喘组小鼠脾脏淋巴细胞STAT5a/b mRNA表达量较正常组小鼠明显增高(T值分别为11.71、33.04,均P＜0.05).(3)与空白对照组比较:特异性siRNA转染哮喘小鼠T细胞后,STAT5a和STAT5b沉默组的mRNA表达明显降低(T值分别为35.014、14.553,均P＜0.01)；STAT5a和STAT5b沉默组蛋白表达也明显降低(T值分别为- 10.958、- 14.706,均P＜0.01)；STAT5a和STAT5b沉默组T细胞增殖率明显降低(T值分别为8.692、10.540,均P＜0.01)；STAT5a和STAT5b沉默组增殖期T细胞均明显降低(T值分别为-6.975、-5.567,均P＜0.05)；STAT5a和STAT5b沉默组T细胞凋亡率明显升高(T值分别为-6.404、-6.038,均P＜0.05).结论 RNA干扰能特异性降低哮喘小鼠STAT5 a/b表达,抑制T细胞的增殖并促进T细胞凋亡.
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