以gfp为报告基因的肺炎链球菌启动子诱捕文库的构建与分析

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首先构建一个以gfp(green fluorescence protein)为报告基因的自杀质粒pEVP3-SDGFP,将肺炎链球菌基因纽DNA的随机酶切片段(200bp~800bp)克隆到该质粒gfp基因上游的多克隆位点,得到约58000个含有肺炎链球菌基因组DNA随机酶切片段的重组子,提取质粒即为质粒库,该库大约覆盖肺炎链球菌基因组全长的5倍,插入率达到90%以上,且有较强的随机性,质量较高。将该质粒库转化入肺炎链球菌TIGR4菌株,带有随机片段的报告质粒通过同源重组的方式将gfp基因融合于细菌染色体
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