【摘 要】
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目的提取SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)并原代培养,为研究肺血管疾病提供体外模型,研究缺氧对大鼠PASMCs增殖的影响。方法组织贴壁法分离大鼠PASMCs,光镜观察细胞形态、透
【机 构】
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南华大学研究生院,湖南省老年医院老年医学研究所呼吸疾病研究室
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目的提取SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)并原代培养,为研究肺血管疾病提供体外模型,研究缺氧对大鼠PASMCs增殖的影响。方法组织贴壁法分离大鼠PASMCs,光镜观察细胞形态、透射电镜、α肌动蛋白(α-SM-actin)细胞免疫化学和细胞免疫荧光法进行鉴定。原代培养的PASMCs分别于常氧和/或低氧下培养2、6、12、24及48 h,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法和增殖细胞核抗原(PCNA)细胞免疫化学法检测细胞增殖情况。结果光镜下PASMCs细胞为长梭形,呈典型的"峰-谷"状结构。免疫学检测显示胞浆被染成棕黄色,阳性率达96%以上。透射电镜下细胞呈长梭形,胞浆内有密斑、密体和大量肌丝,细胞器较少。MTT检测结果示各时间点缺氧组PASMCs吸光度(A值)均高于相对应的常氧组;与常氧组比较,低氧组A值在12 h时开始增加(P<0.05),24 h时增加最显著(P<0.01)。与缺氧2 h组比较,A值在缺氧12 h开始增高(P<0.05),缺氧24 h增高最显著(P<0.01),而缺氧48 h与缺氧24 h基本一致。PCNA免疫学结果与MTT结果基本一致。结论用组织块贴壁法提取PASMCs,简单易行,且能得到纯度高、稳定生长的PASMCs。缺氧可以促进PASMCs的增殖。
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