【摘 要】
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目的 探讨自噬在亚砷酸钠(NaAsO2)诱导大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1)死亡过程中的作用及分子机制.方法 实验设阴性对照组,NaAsO2(30、1 5、5μmol/L)组;NaAsO2作用INS-1细胞24 h后
【机 构】
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贵州医科大学药理学教研室,贵阳,550025;贵州医科大学药理学教研室,贵阳550025;环境污染与疾病监控省部共建教育部重点实验室
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目的 探讨自噬在亚砷酸钠(NaAsO2)诱导大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1)死亡过程中的作用及分子机制.方法 实验设阴性对照组,NaAsO2(30、1 5、5μmol/L)组;NaAsO2作用INS-1细胞24 h后,采用CCK8比色法检测INS-1细胞的存活率;透射电子显微镜观察INS-1细胞超微形态;激光扫描共聚焦显微镜观察转染质粒GFP-LC3后INS-1细胞内荧光的表达;蛋白印迹法(WB)法检测LC3、P62、mTOR、PI3K蛋白表达.结果 经NaAsO2作用后,INS-1细胞存活率明显下降;NaAsO2组INS-1细胞中可见双层膜自噬小体与自噬空泡明显增多;转染质粒GFP-LC3后NaAsO2组荧光显微镜下可见绿色点状荧光斑点聚集增多.WB结果表明与阴性对照组LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ[(0.93±0.04)]、P62[(0.57±0.01)]、mTOR[(1.44±0.03)]、PI3K[(1.26±0.07)]比较,30、15、5μmol/L NaAsO2组INS-1细胞中LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ蛋白表达量[分别为(1.34±0.02、1.16±0.02、1.13±0.04)]升高,P62蛋白表达量[分别为(1.89±0.14、1.08±0.06、0.71±0.03)]升高,mTOR蛋白表达量[分别为(0.46±0.04、0.92±0.06、1.15±0.06)]降低,PI3K蛋白表达量[分别为(0.78±0.04、0.87±0.03、0.91±0.04)]降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 NaAsO2暴露可诱导INS-1细胞自噬性死亡,其机制可能与调控PI3K/mTOR信号通路有关.
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