猪和小鼠endoglin原核表达载体的构建及重组蛋白的诱导表达和纯化

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目的:体外扩增猪和小鼠endoglin胞外段基因序列。构建猪和小鼠endoglin重组原核表达质粒,在大肠杆菌中诱导表达,并对表达产物进行分离、纯化和鉴定。方法:设计猪和小鼠endoglin胞外段基因序列的引物,利用RT—PCR技术扩增克隆猪和小鼠endoglin胞外段基因序列,通过限制性核酸内切酶酶切,然后用T7酶连接,构建猪和小鼠endoglin胞外段的原核表达质粒pQE—pEDG和pQE-mEDG。筛选的重组质粒经酶切和DNA序列测定等证实正确后,再转染感受态大肠杆菌JM109,用IPTG诱导表达。
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