【摘 要】
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以阳性噬菌体克隆为模板,通过PCR扩增出目的基因片段并克隆入T载体,经测序证实为美洲大蠊Periplaneta americana变应原Cr PI后,将该基因亚克隆入表达载体pGEX-5X-1.美洲大蠊
【机 构】
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深圳大学生命科学学院,深圳大学生命科学学院,深圳市微生物基因工程重点实验室
【基金项目】
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中国科学院资助项目，广东省科技厅科技计划，广东省深圳市科技计划
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以阳性噬菌体克隆为模板,通过PCR扩增出目的基因片段并克隆入T载体,经测序证实为美洲大蠊Periplaneta americana变应原Cr PI后,将该基因亚克隆入表达载体pGEX-5X-1.美洲大蠊变应原Cr PI在大肠杆菌中得到高效表达,但主要以包涵体形式存在于沉淀中.目的蛋白溶于6 mol/L盐酸胍并经稀释复性后,经Glutathione SepharoseTM 4B亲和层析,纯度达90%以上.以蟑螂过敏病人血清进行免疫印迹检测,结果显示重组变应原具有良好的IgE结合活性.
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