【摘 要】
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目的构建靶向血管扩张刺激磷蛋白(VASP)基因RNA干扰慢病毒表达载体。方法将前期构建的pcDNA6.2-miRVASP进行测序鉴定,筛选阳性克隆。通过Gateway技术中的BP反应及LR反应,将携
【机 构】
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武汉市第一医院病理科,武汉大学基础医学院病理学与病理生理学系
【基金项目】
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湖北省自然科学基金项目(2014CFB340)
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目的构建靶向血管扩张刺激磷蛋白(VASP)基因RNA干扰慢病毒表达载体。方法将前期构建的pcDNA6.2-miRVASP进行测序鉴定,筛选阳性克隆。通过Gateway技术中的BP反应及LR反应,将携带miRVASP的表达框克隆至慢病毒目的载体pLenti6/V5-DEST,构建靶向VASP基因的RNA干扰慢病毒表达载体pLenti6/V5-miRVASP;接着将其与慢病毒包装混合物共转染293FT细胞,收集病毒颗粒,侵染胃癌BGC-823细胞。结果慢病毒表达载体测序结果表明,构建的载体与预期完全一致。用收集的携带miRVASP表达框的慢病毒颗粒侵染BGC-823细胞,荧光显微镜下可见多量细胞表达强绿色荧光,证明包装产生的慢病毒颗粒能侵染BGC-823细胞。结论成功构建了靶向VASP基因的RNA干扰慢病毒表达载体,并包装产生慢病毒颗粒原液,成功侵染BGC-823细胞,为进一步在体内实验中研究VASP在胃癌侵袭转移中的作用奠定了基础。
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