【摘 要】
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目的 建立5-羟基色氨酸(5-HTP)的生物制备方法.方法 合成芽孢杆菌(Bacillus sp.)的苯丙氨酸羟化酶(pah)基因并克隆于载体pTIG-Trx中,将构建完的重组质粒pTIG-Trx-Ba-PAH转入
【机 构】
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河北大学药学院,保定 071002;军事科学院军事医学研究院环境医学与作业医学研究所,天津 300050;军事科学院军事医学研究院环境医学与作业医学研究所,天津 300050;河北大学药学院,保定 0
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目的 建立5-羟基色氨酸(5-HTP)的生物制备方法.方法 合成芽孢杆菌(Bacillus sp.)的苯丙氨酸羟化酶(pah)基因并克隆于载体pTIG-Trx中,将构建完的重组质粒pTIG-Trx-Ba-PAH转入大肠杆菌BL21(DE3)中,获得PAH生产的重组菌株;该菌株经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达和超声波破碎后,通过体外催化反应,将色氨酸催化成5-HTP;最后,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blot)验证PAH蛋白;采用高效液相色谱检测5-HTP含量.结果 经表达的PAH蛋白分子量约为64.37 ku,经Western blot验证,可与PAH抗体特异性结合;通过体外催化反应,5-HTP生成产量为67.4 mg/L.结论 成功构建了用于生产PAH的大肠杆菌重组菌株pTIG-Trx-Ba-PAH/BL21,并完成了5-HTP的生物制备.
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