过量表达星星草(Puc c ine llia te nuiflora)液泡型H+-ATP酶c亚基基因提高转基因酵母的耐盐性

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植物液泡型H+-ATP酶(V-ATPase)在次级转运与应对多种逆境胁迫中具有重要作用。本研究克隆并解析了能够生长在盐碱地上的野生星星草V-ATPase c亚基基因(PutV HA-c)的功能。本研究利用荧光蛋白(GFP)标记结合内涵体染色的方法研究了PutVHA-c蛋白在酵母细胞中的定位,并利用转基因酵母分析了PutV HA-c基因在盐胁迫中的作用。共定位实验显示PutVHA-c-GFP融合蛋白主要定位在酵母细胞的内涵体上。Northern杂交和实时定量PCR显示在星星草悬浮细胞中PutV HA-c基因的表达能够被盐胁迫所诱导。研究结果结合过表达PutV HA-c的转基因酵母具有更高的耐盐性的发现,说明PutV HA-c基因参与着盐胁迫的应答。“,”Plant vacuolar-type H+-ATPase (V-ATPase) plays an important role in secondary transport as well as in response to different adverse environmental conditions. In the present study, we cloned and characterized a V-ATPase c subunit gene (PutVHA-c) from Puccinellia tenuiflora, which can grow in saline, alkali soil. We exami-ned the subcellular targeting of PutVHA-c in yeast cells by combining the GFP marker and endosomal marker dye FM4-64 staining. Further, we characterized the biological function of the PutV HA-c gene in salt stress by using the transgenic yeast. Co-localization experiments showed that PutVHA-c-GFP was preferentially localized to the endosome in yeast cells. Northern blotting and quantitative PCR indicated that PutV HA-c expression was induced by salt stress in P. tenuiflora suspension cells. These data, plus the finding that transgenic yeast overexpressing PutV HA-c had increased salt tolerance, suggested that PutV HA-c might be involved in the salt stress response.
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