【摘 要】
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目的 观察经蛛网膜下腔不同次数移植的BMSCs在Wistar大鼠损伤脊髓内的存活、迁移及对大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)修复的作用,探讨BMSCs移植的最佳次数. 方法 8只2
【机 构】
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兰州军区兰州总医院脊柱外科,兰州,730050;嘉峪关市第二人民医院药械科
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目的 观察经蛛网膜下腔不同次数移植的BMSCs在Wistar大鼠损伤脊髓内的存活、迁移及对大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)修复的作用,探讨BMSCs移植的最佳次数. 方法 8只2月龄Wistar大鼠,体重约120 g.取股骨骨髓体外分离培养第2代BMSCs,用Hoechst 33342标记.另取75只成年Wistar大鼠体重约220 g,采用改良Allen法制备T_(9、10)SCI模型.随机分为5组(n=15),A组经蛛网膜下腔置管移植1次1 × 10~7个/mL BMSCs悬液0.1 mL(术后1周),B组2次(术后1、3周),C组3次(术后1、3、5周),D组5次(术后1、3、5、7、9周),E组于术后1、3、5、7、9周各注入0.2 mL PBS作为空白对照.SCI术后不同时间点行大鼠后肢Basso-Beattie-Bresnahan (BBB)评分评价神经功能状况,并行荧光显微镜、HE染色、免疫组织化学染色观察BMSCs在体内迁移、存活及分化情况. 结果 术后3周,A～D组BBB评分均有明显增加,与E组比较差异均有统计学意义(P<0.01).术后7、9、12周,C、D组BBB评分均明显高于A、B组(P<0.01),B组高于A组(P0.05).荧光显微镜观察示术后3周,移植的BMSCs存活于损伤脊髓边缘,A组细胞数达高峰:随后A组细胞数逐渐减少,B、C、D组分别于术后5、7、7周细胞数达高峰后逐渐下降.12周C、D组存活细胞数显著多于A、B组,差异有统计学意义(P0.05).HE染色示术后3周损伤脊髓形成的空洞A、B、C、D组逐渐减小,12周C、D组空洞最小,A、B组次之,E组最大.免疫组织化学染色示神经丝蛋白200(neurofilament 200,NF-200)细胞数变化趋势与BMSCs存活细胞数类似.术后12周NF-200阳性细胞数在C、D组表达较A、B组明显;神经元样细胞发出的神经丝穿过损伤区在C、D组最明显,A、B组较少. 结论 多次移植BMSCs更有利于SCI修复,移植以3次为最好.
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