【摘 要】
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为了快速准确地检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)污染、控制其危害,本研究制备了高灵敏度的DON单克隆抗体,并建立了间接竞争酶联免疫吸附(ELISA)快速检测方法.采用N,N'-羰基二咪
【机 构】
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河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州450002;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州450002;河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002
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为了快速准确地检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)污染、控制其危害,本研究制备了高灵敏度的DON单克隆抗体,并建立了间接竞争酶联免疫吸附(ELISA)快速检测方法.采用N,N'-羰基二咪唑(N,NLCarbonyldiimidazole,CDI)一步法将DON与载体蛋白BSA及OVA偶联制备人工抗原.用DON-BSA免疫小鼠,并根据免疫效果在常规免疫方案中增加腹腔免疫进行改进,利用细胞融合技术,获得能稳定分泌DON单克隆抗体的杂交瘤细胞株1株2A3-E11.经鉴定该细胞株分泌的DON抗体为IgG1型,效价达1∶1.024×106,ICs0为21.507 9μg/L,亲和力可达9.064×108 mol/L;与15-AcDON有233.7％的交叉反应,与其他结构类似物及常见真菌毒素未见明显交叉反应.基于该抗体建立的间接竞争ELISA检测方法检测范围为4.696 8～98.490 0μg/L,小麦样品中的加标回收率为90.509％～116.016％,变异系数为3.081％～7.928％.研制的间接竞争ELISA检测方法灵敏度高、结果可靠,可进一步应用于小麦等谷物样品中DON污染的检测,为DON的免疫学检测技术研发奠定基础.
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