小鼠瘦素基因的原核表达及产物纯化

• 作 者: 李宏睿 张文波 Lennart Zabeau Jan Tav
• 机 构: 江西农业大学食品科学与工程学院,江西农业大学动物科学技术学院,比利时Ghent大学医学系医用蛋白研究室佛兰得斯校际生物技术研究所
• 出 处: 中国动脉硬化杂志
• 发表日期: 2009年4期
• 关键词: 小鼠瘦素 包涵体 WESTERN BLOTTING 亲和纯化 Leptin Inclusion Body Western Blotting Affin
• 基金项目: 江西农业大学校青年基金项目（1889）

目的应用大肠杆菌表达系统进行小鼠瘦素基因的克隆、表达、产物纯化与鉴定。方法应用聚合酶链扩增技术，以含有小鼠瘦素eDNA序列的质粒pMET mouse leptin为模板，扩增后克隆至载体pET-28a（＋）构建重组表达载体pET-28a-lep，酶切、测序正确后，转化大肠杆菌E.coli BL21，构建工程菌株BL21-pET-lep。使用0.1mmol／L异丙基-硫代半乳糖苷，在不同的时间段诱导蛋白表达，利用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺电泳和Western Blotting检测瘦素蛋白的分子质量以及最佳表