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摘 要：目的：建立HPLC-VWD法测定饮料中甜味剂阿力甜含量的方法。方法：碳酸饮料水浴除去CO2后用水提取，含乳饮料沉淀蛋白后用乙醇水溶液提取，0.45 μm水系滤膜过滤，经C18柱分离，用VWD检测定量。结果：阿力甜在5.0～100.0 μg/mL范围内线性良好，r=0.999 96，检出限为0.006 g/kg，回收率为99.7%～106.1%，RSD为0.43%～1.34%。结论：该方法适用于对饮料中阿力甜含量准确、快速的检测。
关键词：饮料;阿力甜;高效液相色谱法
阿力甜是一种人工合成的甜度高、口感好、热量低的甜味剂，具有良好的贮存与加工稳定性，作为代糖物质被广泛用于饮料、糖果等食品加工领域[1]。然而，人工合成甜味剂都有着严格的适用范围与添加限量，超范围使用或过量添加会引起食用者出现不同程度的毒性表现，对人们的身体健康与食品行业发展不利，所以加强对饮料等销量较高、深受广大消费者追捧的日常食品中甜味剂的监管与检测非常必要[2-3]。
GB 5009.263—2016[4]中规定了用高效液相色谱法检测食品中阿斯巴甜与阿力甜含量的方法，推荐使用DAD检测器和VWD检测器，本研究参照该标准，结合实验室现有设备，建立了HPLC-VWD法测定饮料中阿力甜含量的方法。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
雪碧、优酸乳（购自某超市）;阿力甜标准品（编号：99016-42-9，批号：B0002377）;甲醇、乙腈均为色谱纯;乙醇为优级纯;试验用水为一级超纯水。
Agilent 1260高效液相色谱仪（配紫外检测器）;AL104电子天平（精度0.0001g）;恒温水浴锅;高速离心机;涡旋混合器;Synergy超纯水机等。
1.2 试验方法
1.2.1 试样处理方法
（1）以碳酸饮料雪碧作为基质，准确称取5 g试样于50.0 mL烧杯中，在50 ℃恒温水浴锅中水浴除去CO2后转入25.0 mL容量瓶中，用超纯水定容，摇匀，经0.45 μm水系滤膜过滤，上机检测。
（2）以含乳饮料优酸乳作为基质，准确称取5 g试样于50.0 mL离心管中，加入10 mL乙醇，轻轻振摇5次，静置1 min，于4 000 r/min离心机中离心5 min，将上清液转入25.0 mL容量瓶中，用8 mL乙醇+水（2+1）洗涤沉淀，离心后将上清液合并至同一容量瓶，用乙醇+水（2+1）定容，摇匀，经0.45 μm水系滤膜过滤，上机检测。
1.2.2 标准溶液配制
准确称取0.025 0 g阿力甜标准品，用超纯水溶解并定容至50.0 mL，配制得浓度为0.5 mg/mL的阿力甜標准储备液。
准确移取0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL和2.0 mL阿力甜标准储备液至5支10.0 mL容量瓶中，用超纯水定容至刻度，摇匀，配制成质量浓度为5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、25.0 μg/mL、50.0 μg/mL和100.0 μg/mL的标准工作系列。
1.2.3 液相色谱条件
色谱柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），柱温30 ℃;流动相：甲醇+水（40+60），流速0.8 mL/min，等度洗脱;进样量：20 μL;检测器为VWD（200 nm）。
2 结果与分析
2.1 阿力甜标准溶液的色谱分离分析
采用上述仪器条件，在25 min内能完成色谱分析，阿力甜标准溶液的峰型尖锐对称，且与杂质峰较好分离，阿力甜标准溶液的色谱图如图1所示。
2.2 线性范围及检出限
将配制的标准工作系列在上述色谱条件下进行测定，以标准系列点浓度为横坐标，对应的色谱峰面积为纵坐标绘制标准曲线。标准曲线方程为f（x）=57.946 29x+15.991 24，相关系数r=0.999 96，由此可见，阿力甜在5.0～100.0 μg/mL范围内线性关系良好。根据3倍信噪比对应的目标物含量计算方法检出限，得该方法的检出限为0.006 g/kg。
2.3 方法回收率与精密度
向某雪碧试样、优酸乳试样中添加低、中、高3种浓度水平的阿力甜标准溶液，按照上述试样处理方法、色谱分析条件将每个浓度水平平行测定6次，计算加标回收率与相对标准偏差RSD，结果见表1。
该方法的回收率为99.7%～106.1%，相对标准偏差RSD为0.43～1.34%。
3 结论
本研究建立的HPLC-VWD法测定饮料中甜味剂阿力甜含量的方法，线性关系良好，检出限、回收率、精密度符合GB 5009.263-2016及GB/T 27404-2008[5]的相关要求，能够满足实验室对饮料中阿力甜含量准确、快速、高通量的检测需求。
参考文献
[1]金博艳.超高效液相色谱测定饮料中的阿斯巴甜和阿力甜[J].分析仪器，2020（4）：30-33.
[2]鲁琳，杭义萍，高燕红.高效液相色谱法快速检测乳饮料中常用甜味剂[J].食品科学，2009，30（10）：166-168.
[3]王然然，王楠楠，苗育可，等.高效液相色谱法同时测定食品中8种食品添加剂[J].现代食品，2021（5）：148-150.
[4]国家卫生和计划生育委员会，国家食品药品监督管理总局.食品安全国家标准 食品中阿斯巴甜和阿力甜的测定：GB 5009.263—2016[S].北京：中国标准出版社，2016.
[5]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会.实验室质量控制规范 食品理化检测：GB/T 27404—2008[S].北京：中国标准出版社，2008.
关键词：饮料;阿力甜;高效液相色谱法
阿力甜是一种人工合成的甜度高、口感好、热量低的甜味剂，具有良好的贮存与加工稳定性，作为代糖物质被广泛用于饮料、糖果等食品加工领域[1]。然而，人工合成甜味剂都有着严格的适用范围与添加限量，超范围使用或过量添加会引起食用者出现不同程度的毒性表现，对人们的身体健康与食品行业发展不利，所以加强对饮料等销量较高、深受广大消费者追捧的日常食品中甜味剂的监管与检测非常必要[2-3]。
GB 5009.263—2016[4]中规定了用高效液相色谱法检测食品中阿斯巴甜与阿力甜含量的方法，推荐使用DAD检测器和VWD检测器，本研究参照该标准，结合实验室现有设备，建立了HPLC-VWD法测定饮料中阿力甜含量的方法。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
雪碧、优酸乳（购自某超市）;阿力甜标准品（编号：99016-42-9，批号：B0002377）;甲醇、乙腈均为色谱纯;乙醇为优级纯;试验用水为一级超纯水。
Agilent 1260高效液相色谱仪（配紫外检测器）;AL104电子天平（精度0.0001g）;恒温水浴锅;高速离心机;涡旋混合器;Synergy超纯水机等。
1.2 试验方法
1.2.1 试样处理方法
（1）以碳酸饮料雪碧作为基质，准确称取5 g试样于50.0 mL烧杯中，在50 ℃恒温水浴锅中水浴除去CO2后转入25.0 mL容量瓶中，用超纯水定容，摇匀，经0.45 μm水系滤膜过滤，上机检测。
（2）以含乳饮料优酸乳作为基质，准确称取5 g试样于50.0 mL离心管中，加入10 mL乙醇，轻轻振摇5次，静置1 min，于4 000 r/min离心机中离心5 min，将上清液转入25.0 mL容量瓶中，用8 mL乙醇+水（2+1）洗涤沉淀，离心后将上清液合并至同一容量瓶，用乙醇+水（2+1）定容，摇匀，经0.45 μm水系滤膜过滤，上机检测。
1.2.2 标准溶液配制
准确称取0.025 0 g阿力甜标准品，用超纯水溶解并定容至50.0 mL，配制得浓度为0.5 mg/mL的阿力甜標准储备液。
准确移取0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL和2.0 mL阿力甜标准储备液至5支10.0 mL容量瓶中，用超纯水定容至刻度，摇匀，配制成质量浓度为5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、25.0 μg/mL、50.0 μg/mL和100.0 μg/mL的标准工作系列。
1.2.3 液相色谱条件
色谱柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），柱温30 ℃;流动相：甲醇+水（40+60），流速0.8 mL/min，等度洗脱;进样量：20 μL;检测器为VWD（200 nm）。
2 结果与分析
2.1 阿力甜标准溶液的色谱分离分析
采用上述仪器条件，在25 min内能完成色谱分析，阿力甜标准溶液的峰型尖锐对称，且与杂质峰较好分离，阿力甜标准溶液的色谱图如图1所示。
2.2 线性范围及检出限
将配制的标准工作系列在上述色谱条件下进行测定，以标准系列点浓度为横坐标，对应的色谱峰面积为纵坐标绘制标准曲线。标准曲线方程为f（x）=57.946 29x+15.991 24，相关系数r=0.999 96，由此可见，阿力甜在5.0～100.0 μg/mL范围内线性关系良好。根据3倍信噪比对应的目标物含量计算方法检出限，得该方法的检出限为0.006 g/kg。
2.3 方法回收率与精密度
向某雪碧试样、优酸乳试样中添加低、中、高3种浓度水平的阿力甜标准溶液，按照上述试样处理方法、色谱分析条件将每个浓度水平平行测定6次，计算加标回收率与相对标准偏差RSD，结果见表1。
该方法的回收率为99.7%～106.1%，相对标准偏差RSD为0.43～1.34%。
3 结论
本研究建立的HPLC-VWD法测定饮料中甜味剂阿力甜含量的方法，线性关系良好，检出限、回收率、精密度符合GB 5009.263-2016及GB/T 27404-2008[5]的相关要求，能够满足实验室对饮料中阿力甜含量准确、快速、高通量的检测需求。
参考文献
[1]金博艳.超高效液相色谱测定饮料中的阿斯巴甜和阿力甜[J].分析仪器，2020（4）：30-33.
[2]鲁琳，杭义萍，高燕红.高效液相色谱法快速检测乳饮料中常用甜味剂[J].食品科学，2009，30（10）：166-168.
[3]王然然，王楠楠，苗育可，等.高效液相色谱法同时测定食品中8种食品添加剂[J].现代食品，2021（5）：148-150.
[4]国家卫生和计划生育委员会，国家食品药品监督管理总局.食品安全国家标准 食品中阿斯巴甜和阿力甜的测定：GB 5009.263—2016[S].北京：中国标准出版社，2016.
[5]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会.实验室质量控制规范 食品理化检测：GB/T 27404—2008[S].北京：中国标准出版社，2008.