人巨细胞病毒pp65蛋白的原核表达及活性鉴定

• 作 者: 许凤 邱义兰 邱果 李桑 何赛 郑姣 李小曼 刘如石
• 机 构: 湖南师范大学生命科学学院,湖南师范大学医学院
• 出 处: 生命科学研究
• 发表日期: 2013年4期
• 关键词: 人巨细胞病毒pp65蛋白 质谱 酶联免疫吸附(ELISA) 免疫反应性 免疫原性 HCMV pp65 protein mass spectrometry E
• 基金项目: 国家自然科学基金资助项目（31072141）,湖南省科技计划重点项目（2011SK2014）,长沙市科技计划重点项目（K1104047-31）,湖南省自然科学基金重点资助项目（12JJ2013）,湖南省高等学校科学研究青年项（108060）,湖南省科技计划项目（2013SK3129）

以病毒全基因组为模板，通过PCR技术扩增HCMVpp65基因编码序列．其产物连接到pMD18-T质粒，酶切并回收目的片段后克隆到表达载体pTO—T7，然后将重组质粒pTO—T7-pp65转化大肠杆菌ER2566，大量表达后将重组蛋白进行质谱法分析鉴定，再利用Westernblot以及间接ELISA进行重组蛋白的活性及抗原性鉴定．结果显示：通过SDS—PAGE鉴定可知，大肠杆菌可能表达出了重组蛋白，质谱分析结果说明了重组蛋白为pp65蛋白，具有极高可信度，其相对分子质量约为63kD，从Westernblot