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摘 要：高效液相色谱法是医学研究中对药品含量进行测定时较常使用的一种分离分析技术，对于药品成分以及药效的研究具有重要意义。相较于其他传统的分离技术来讲，高效液相色谱法的灵敏度更高，分离更彻底，速度也更快，所测定的结果更加精确，这是其他分离技术所不能达到的。现本文就主要研究了使用高效液相色谱法进行卡铂粉针与水针剂的含量测定，目的是为了确定这两种针剂的高效液相色谱法测定是否可行。通过试验测定后，我们得出的结论是使用高效液相色谱法进行卡铂针剂的含量测定是具有很强的操作性与可行性的。
关键词：高效液相色谱法；卡铂；粉针剂；水针剂；含量测定
一般来讲，使用高效液相色谱法进行药品成分含量的测定，都能得到较为准确的测定结果，并且其也在医药研究中有着广泛的应用。但由于医药种类太多，还有一些药品的成分测定并没有使用高效液相色谱法进行含量测定，其能否使用这种方法还有待研究。例如本文中所探讨的卡铂针剂，在对其含量进行测量的方法中也并未廣泛使用高效液相色谱法。为此我们决定对其进行试验研究，以验证高效液相色谱法在卡铂针剂含量测定中的可行性，为提高卡铂粉针与水针剂的检验测定效率提供重要理论依据。
1、卡铂粉针与水针剂的特点
在采用高效液相色谱法进行含量测定之前，首先要明确卡铂粉针与水针剂的相关特点以及其各自的功用特性。掌握在卡铂针剂含量测定中需要注意的问题。卡铂是一种在临床医学中应用非常普遍的抗癌药物，研究其含量大小对于临床应用中的剂量控制有着重要的现实意义。
纯净的卡铂在固体状态下主要呈现出白色结晶粉末状，卡铂的水溶性相对较差，仅能微溶于水，并且在有机溶剂里完全不能溶解。当其所处温度超过120℃时，固态卡铂的颜色会有所变化，当达到247℃-258℃时，就会分解为粉末状。相对来讲，固态卡铂在光环境下性质较为稳定，而在水溶液中则较易出现降解现象，尤其是在紫外光线作用下，降解速度会更快。另外，卡铂在5%葡萄糖或0.45%的氯化钠溶液中，前6h是稳定的，但在25℃24h损失2%；在0.9%氯化钠溶液中24h损失5%，在37℃温度下24h则损失10%。故应避光并使用不含氯的溶液溶解卡铂。卡铂与铝可产生黑色沉淀，不宜直接接触。
从医药价值方面来讲，卡铂对于抗肿瘤活性的能力较强，并且对患者的消化系统与肾脏系统产生的毒副作用相对较低，对肿瘤细胞有抑制作用，在卵巢癌、肺癌、头颈部癌、生殖细胞肿瘤、甲状腺癌、宫颈癌、膀胱癌等诸多癌症疾病的临床治疗中有着显著的疗效。其最常见的针剂类型为冻干粉针剂，近年来也有一些水针剂逐渐被广泛使用，相较于冻干粉针剂来讲，水针剂的生产工艺更简便，临床应用也更易操作。但在静脉注射时，不能让针剂受到阳光直射，一般最好使用黑纸将其遮住，以免针剂遇光而分解失效。
2、高效液相色谱法测定卡铂粉针、水针剂含量
在明确了卡铂的物理、化学以及医药性质后，初步可以判定使用高效液相色谱法进行卡铂针剂含量的测定是可行的。以下我们就来详细介绍其实验步骤与结果分析。
2.1仪器与试药
在本实验中所使用的仪器主要有ShimadzuLC-6A型高效液相色谱仪；SPD-6A型UV检测器；C-R3A型积分仪。注射用水，使用前过滤脱气。卡铂对照品（昆明贵金属研究所，批号090511）；卡铂剂粉针剂（浙江省医学科学院药厂，规格：100mg/瓶，批号：111018，120116，120124），卡铂剂水针剂（商品名伯尔定，百时美施贵宝公司，规格：150mg：15mL；批号：1K48297，2D51156，2F56 975）。
2.2方法与结果
2.2.1色谱条件。色谱柱：Spherisorb C18（10um，4.6mm ×250mm）不锈钢柱；流动相水，流速1.0mL min-1；柱温：300℃，检测波长：229nm；进样量：10 ul。记录色谱图，测定峰面积，按外标法计算含量。色谱图见图1。
2.2.2 溶液的配制
首先，要对卡铂对照品溶液进行配制，精密称取经干燥恒重的卡铂对照品约260mg，置25mL量瓶中，加水稀释至刻度。吸取此溶液0.1-3.2mL，置10mL量瓶中，加水稀释至刻度，得卡铂对照品溶液。
其次，要配制卡铂供试品溶液。卡铂粉针剂或水针剂加水适量稀释后置于10mL量瓶中，得卡铂供试品溶液。所有溶液均避光保存。
2.2.3线性范围。精密吸取卡铂对照品0.1，0.2，0.4，0.8，1.6，3.2g.L-1的溶液，按上述色谱条件，分别进样10uL，每种浓度重复进样3次。以浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标，进行线性回归，得标准曲线：A=5.301×103C+24，r=0.9999，线性范围0.1-3.2 g.L-1。
2.2.4稳定性试验。精密吸取同一浓度供试品溶液10uL，室温条件下分别于0.1，2，4d进样测定，峰面积基本不变，RSD分别为粉针剂0.7%，水针剂0.9%（n=5）。样品稳定性良好。
2.2.5精密度试验。精密量取对照品溶液，重复进样5次，样品峰面积比的变化小于0.7%。
2.2.6重现性试验。测定同一批供试品溶液5份，结果粉针剂和水针剂的含量平均值分别为标示量的99.2%和101.2%，RSD为0.5%和0.8%。
2.2.7回收率试验。精密量取粉针剂和水针剂供试品溶液，分别加至含已知量对照品溶液的25mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，取10uL进样，计算回收率和相对标准偏差。结果，平均回收率分别为粉针剂98.1%，水针剂101.3%；RSD分别为粉针剂0.8%，水针剂1.1%（n=5）。
2.2.8样品的测定。取供试品溶液和对照品溶液，分别精密量取上述溶液10uL，注入仪器，记录色谱图，测量对照品和供试品待测成分的峰面积，按外标峰面积法计算含量。测定3批样品，结果见表1。
表1 样品测定结果（n=3）
3、讨论
从上述试验的结果分析可以看出，在本试验的条件下使用高效液相色谱法进行卡铂粉针与水针剂的含量测定时，在液相色谱中显示出的卡铂的出峰时间大概在6.52min左右时出现。也就是说其理论上的塔板数是大于13250的。并且因为卡铂粉针剂的辅料是甘露醇，而水针剂中也没有其他成分，因此其空白溶剂对于色谱图的显示并没有太大的影响。但是由于卡铂怕光，为此在试验中要做好避光工作，并保证试验室的温度稳定。通过本试验的研究，很好的证明了在卡铂的针剂含量测定中，使用高效液相色谱法进行测定的可行性与高效性，测定方法简单易操作，且所需时间较短，非常适合在卡铂针剂的生产中进行质量控制检测，也可以用在卡铂针剂保存中的质量检测和含量测定。
参考文献
[1]宋红英等；卡铂的药理作用及分析方法[J]；浙江省医学科学院学报；2005.
[2]杨水艳等；铂类抗癌配合物的高效液相色谱法研究进展[J]；贵金属；2011.
关键词：高效液相色谱法；卡铂；粉针剂；水针剂；含量测定
一般来讲，使用高效液相色谱法进行药品成分含量的测定，都能得到较为准确的测定结果，并且其也在医药研究中有着广泛的应用。但由于医药种类太多，还有一些药品的成分测定并没有使用高效液相色谱法进行含量测定，其能否使用这种方法还有待研究。例如本文中所探讨的卡铂针剂，在对其含量进行测量的方法中也并未廣泛使用高效液相色谱法。为此我们决定对其进行试验研究，以验证高效液相色谱法在卡铂针剂含量测定中的可行性，为提高卡铂粉针与水针剂的检验测定效率提供重要理论依据。
1、卡铂粉针与水针剂的特点
在采用高效液相色谱法进行含量测定之前，首先要明确卡铂粉针与水针剂的相关特点以及其各自的功用特性。掌握在卡铂针剂含量测定中需要注意的问题。卡铂是一种在临床医学中应用非常普遍的抗癌药物，研究其含量大小对于临床应用中的剂量控制有着重要的现实意义。
纯净的卡铂在固体状态下主要呈现出白色结晶粉末状，卡铂的水溶性相对较差，仅能微溶于水，并且在有机溶剂里完全不能溶解。当其所处温度超过120℃时，固态卡铂的颜色会有所变化，当达到247℃-258℃时，就会分解为粉末状。相对来讲，固态卡铂在光环境下性质较为稳定，而在水溶液中则较易出现降解现象，尤其是在紫外光线作用下，降解速度会更快。另外，卡铂在5%葡萄糖或0.45%的氯化钠溶液中，前6h是稳定的，但在25℃24h损失2%；在0.9%氯化钠溶液中24h损失5%，在37℃温度下24h则损失10%。故应避光并使用不含氯的溶液溶解卡铂。卡铂与铝可产生黑色沉淀，不宜直接接触。
从医药价值方面来讲，卡铂对于抗肿瘤活性的能力较强，并且对患者的消化系统与肾脏系统产生的毒副作用相对较低，对肿瘤细胞有抑制作用，在卵巢癌、肺癌、头颈部癌、生殖细胞肿瘤、甲状腺癌、宫颈癌、膀胱癌等诸多癌症疾病的临床治疗中有着显著的疗效。其最常见的针剂类型为冻干粉针剂，近年来也有一些水针剂逐渐被广泛使用，相较于冻干粉针剂来讲，水针剂的生产工艺更简便，临床应用也更易操作。但在静脉注射时，不能让针剂受到阳光直射，一般最好使用黑纸将其遮住，以免针剂遇光而分解失效。
2、高效液相色谱法测定卡铂粉针、水针剂含量
在明确了卡铂的物理、化学以及医药性质后，初步可以判定使用高效液相色谱法进行卡铂针剂含量的测定是可行的。以下我们就来详细介绍其实验步骤与结果分析。
2.1仪器与试药
在本实验中所使用的仪器主要有ShimadzuLC-6A型高效液相色谱仪；SPD-6A型UV检测器；C-R3A型积分仪。注射用水，使用前过滤脱气。卡铂对照品（昆明贵金属研究所，批号090511）；卡铂剂粉针剂（浙江省医学科学院药厂，规格：100mg/瓶，批号：111018，120116，120124），卡铂剂水针剂（商品名伯尔定，百时美施贵宝公司，规格：150mg：15mL；批号：1K48297，2D51156，2F56 975）。
2.2方法与结果
2.2.1色谱条件。色谱柱：Spherisorb C18（10um，4.6mm ×250mm）不锈钢柱；流动相水，流速1.0mL min-1；柱温：300℃，检测波长：229nm；进样量：10 ul。记录色谱图，测定峰面积，按外标法计算含量。色谱图见图1。
2.2.2 溶液的配制
首先，要对卡铂对照品溶液进行配制，精密称取经干燥恒重的卡铂对照品约260mg，置25mL量瓶中，加水稀释至刻度。吸取此溶液0.1-3.2mL，置10mL量瓶中，加水稀释至刻度，得卡铂对照品溶液。
其次，要配制卡铂供试品溶液。卡铂粉针剂或水针剂加水适量稀释后置于10mL量瓶中，得卡铂供试品溶液。所有溶液均避光保存。
2.2.3线性范围。精密吸取卡铂对照品0.1，0.2，0.4，0.8，1.6，3.2g.L-1的溶液，按上述色谱条件，分别进样10uL，每种浓度重复进样3次。以浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标，进行线性回归，得标准曲线：A=5.301×103C+24，r=0.9999，线性范围0.1-3.2 g.L-1。
2.2.4稳定性试验。精密吸取同一浓度供试品溶液10uL，室温条件下分别于0.1，2，4d进样测定，峰面积基本不变，RSD分别为粉针剂0.7%，水针剂0.9%（n=5）。样品稳定性良好。
2.2.5精密度试验。精密量取对照品溶液，重复进样5次，样品峰面积比的变化小于0.7%。
2.2.6重现性试验。测定同一批供试品溶液5份，结果粉针剂和水针剂的含量平均值分别为标示量的99.2%和101.2%，RSD为0.5%和0.8%。
2.2.7回收率试验。精密量取粉针剂和水针剂供试品溶液，分别加至含已知量对照品溶液的25mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，取10uL进样，计算回收率和相对标准偏差。结果，平均回收率分别为粉针剂98.1%，水针剂101.3%；RSD分别为粉针剂0.8%，水针剂1.1%（n=5）。
2.2.8样品的测定。取供试品溶液和对照品溶液，分别精密量取上述溶液10uL，注入仪器，记录色谱图，测量对照品和供试品待测成分的峰面积，按外标峰面积法计算含量。测定3批样品，结果见表1。
表1 样品测定结果（n=3）
3、讨论
从上述试验的结果分析可以看出，在本试验的条件下使用高效液相色谱法进行卡铂粉针与水针剂的含量测定时，在液相色谱中显示出的卡铂的出峰时间大概在6.52min左右时出现。也就是说其理论上的塔板数是大于13250的。并且因为卡铂粉针剂的辅料是甘露醇，而水针剂中也没有其他成分，因此其空白溶剂对于色谱图的显示并没有太大的影响。但是由于卡铂怕光，为此在试验中要做好避光工作，并保证试验室的温度稳定。通过本试验的研究，很好的证明了在卡铂的针剂含量测定中，使用高效液相色谱法进行测定的可行性与高效性，测定方法简单易操作，且所需时间较短，非常适合在卡铂针剂的生产中进行质量控制检测，也可以用在卡铂针剂保存中的质量检测和含量测定。
参考文献
[1]宋红英等；卡铂的药理作用及分析方法[J]；浙江省医学科学院学报；2005.
[2]杨水艳等；铂类抗癌配合物的高效液相色谱法研究进展[J]；贵金属；2011.