【摘 要】
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目的:构建和鉴定靶向磷脂酰肌醇激酶-3(PI3K) 亚单位编码基因PI3Kcb (catalytic,beta polypeptide)基因的小干扰RNA真核表达载体.方法:根据siRNA设计原则,在PI3Kcb mRNA序列
【机 构】
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广东省中医院麻醉科,北京本原正阳公司
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目的:构建和鉴定靶向磷脂酰肌醇激酶-3(PI3K) 亚单位编码基因PI3Kcb (catalytic,beta polypeptide)基因的小干扰RNA真核表达载体.方法:根据siRNA设计原则,在PI3Kcb mRNA序列中选择1个特异性靶序列,体外合成对应发卡样DNA片段,经退火后,将其定向克隆入siRNA载体pDC316-EGFP-U6,重组后获得siRNA载体质粒pDC316-PI3Kcb siRNA-EGFP,采用PCR检测和DNA测序以保证siRNA的方向和序列正确.结果:得到阳性重组克隆pDC316-PI3Kcb siRNA,经过PCR鉴定和测序,结果正确.结论:成功构建靶向PI3Kcb基因的siRNA载体pDC316-PI3Kcb siRNA-EGFP,为PI3Kcb的基因沉默研究奠定了可靠的基础.
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