【摘 要】
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目的构建肝素酶(heparanase,Hpa)反义RNA真核表达载体.方法提取胃癌组织总RNA,按照GenBank中检索出的Hpa基因cDNA序列,设计并合成反义Hpa基因片段的引物,进行RT-PCR,并将扩增
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目的构建肝素酶(heparanase,Hpa)反义RNA真核表达载体.方法提取胃癌组织总RNA,按照GenBank中检索出的Hpa基因cDNA序列,设计并合成反义Hpa基因片段的引物,进行RT-PCR,并将扩增产物克隆至pGEM-T载体,PCR鉴定及测序证实后,双酶切pGEM-T-antiHpa重组体回收目的片段,再将其反向亚克隆到真核表达质粒pcDNA3.1中,并对阳性克隆进行酶切鉴定和测序分析.结果PCR扩增出的反义片段与预期长度相符.构建的Hpa反义RNA表达质粒pcDNA3.1-antiHpa,分别作PCR及双酶切(BamHⅠ和HindⅢ)鉴定,证实其中有目的片段完整插入,插入片段测序结果与反义Hpa序列设计完全一致.结论成功构建了Hpa反义RNA真核表达载体pcD-NA3.1-antiHpa,此结果为进一步研究Hpa蛋白分子的生物学功能和以Hpa为靶点的恶性肿瘤的基因治疗研究奠定了基础.
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