【摘 要】
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目的 利用基因定点突变的方法将刚地弓形虫微线体蛋白2 (MIC2)的767位氨基酸的碱基定点突变,蛋白相互作用技术分析突变体的特性.方法 利用基因定点突变的方法,将MIC2蛋白羧基
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目的 利用基因定点突变的方法将刚地弓形虫微线体蛋白2 (MIC2)的767位氨基酸的碱基定点突变,蛋白相互作用技术分析突变体的特性.方法 利用基因定点突变的方法,将MIC2蛋白羧基端(MIC2C)的767位色氨酸(tryptophan,W)的碱基突变为丙氨酸(alanine,A)的碱基,PCR扩增MIC2C W/A突变体基因片段;构建MIC2CW/A/pGEX-4T-1重组原核表达系统,IPTG诱导表达GST-MIC2C W/A突变体蛋白.以该蛋白和MIC2C蛋白(未突变蛋白)为探针蛋白与弓形虫裂解液进行GST pull-down实验,SDS-PAGE及Western blot分析.结果 获得了MIC2C W/A突变体基因片段,制备了GST-MIC2C W/A突变体蛋白;GST pull-down实验产物分析显示GST-MIC2CW/A蛋白的产物中未见蛋白条带,而未突变蛋白的产物中有一蛋白条带,且能被抗醛缩酶抗体识别.结论 在体外获得了MIC2突变体;MIC2突变体不能沉降弓形虫裂解液中的醛缩酶,即MIC2突变体失去了与醛缩酶作用的特性.
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