同源重组法构建枯草芽孢杆菌转酮酶缺失突变菌株

• 作 者: 彭其安 张西峰 吴思方 王伟平
• 机 构: 湖北工业大学生物工程学院,西北农林科技大学生命科学院
• 出 处: 生物技术
• 发表日期: 2006年6期
• 关键词: 同源重组 枯草芽孢杆菌 转酮酶基因
• 基金项目: 湖北省工业微生物重点实验室开放基金项目资助(No.20040405)

采用同源重组法高效构建枯草芽孢杆菌转酮酶（tkt）缺失突变株。以大肠杆菌（E.coliD145α）质粒pBIUSKM为框架，构建出基于枯草杆菌（B．S104）tkt基因位点的整合载体pb—Trs—n，将此载体重组到Bacillus subtilis 104中，从新霉素抗性平板上挑取转化子，整合载体pb—Trs—n的测序结果与Kunst．F报道的tkt基因高度同源（98．9％）。同源重组后，B．S104染色体上的tkt基因（2004bp）部分与载体pb-Trs-n的neo基因（1197bp）发生了同源交换，