低稳定性绿色荧光蛋白EGFP—PEST的载体构建及表达验证

• 作 者: 袁龙 郑幽 范杰 梁剑青 牛祖彪 高丽华 黄红艳 陈昭烈 管
• 机 构: 山西医科大学第二临床医学院,军事医学科学院生物工程研究所,首都医科大学附属北京世纪坛医院肿瘤内科、肿瘤治疗性疫苗北京市重点实验室,解放军第309医院肿瘤内科
• 出 处: 生物技术通讯
• 发表日期: 2017年4期
• 关键词: PEST序列 基因编辑 蛋白酶体 绿色荧光蛋白 PEST motif gene edition proteasome EGFP
• 基金项目: 国家自然科学基金（81572799,31671432）,国家重点研发计划（2016YFC1303303）

目的：构建含有蛋白降解基序PEST序列的增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合基因表达载体pQcxIP—EGFP—PEST—N1，并检测其对蛋白稳定性的调节。方法：以NFATx6-mPro—EGFP—PEST—YES为模板，PCR扩增EGFP—PEST序列，克隆入逆转录病毒载体pQCXIP—EGFP—N1构建pQCXIP—EGFP-PEST-N1，病毒包装后感染293FT细胞获得稳定细胞系；用蛋白酶体抑制剂MG-132处理细胞，Western印迹检测EGFP的表达变化。结果：构建获得逆转录病毒载体pQCXIP