副猪嗜血杆菌环介导等温扩增快速检测方法的建立

• 作 者: 侯魁 丁轲 刘守业 余祖华 赵战勤
• 机 构: 河南科技大学河南省动物疫病与公共卫生重点实验室,河南科技大学宏翔生物饲料实验室,大石桥市高坎动物卫生监督所
• 出 处: 河南科技大学学报(自然科学版)
• 发表日期: 2017年6期
• 关键词: 副猪嗜血杆菌 16S rRNA 环介导等温扩增 灵敏性 特异性
• 基金项目: 国家“十三五”重点研发计划基金项目(2016YFD0500700)

为了建立一种简便、快速、灵敏、特异的副猪嗜血杆菌（Hps）检测方法,以Hps的16S rRNA保守区域片段为靶序列,选择6个特异性区域,设计4条特异性引物F3、B3、FIP和BIP。经优化反应体系、检测灵敏性和特异性,建立Hps的环介导等温扩增（LAMP）快速检测方法。研究结果表明：该方法的最优反应体系是引物c（F3）∶c（FIP）或c（B3）∶c（BIP）为1∶4、Mg^2＋浓度为2 mmol/L、d NTPs浓度为6 mmol/L,最低检出量为0.241pg/μL DNA。该方法灵敏度是PCR法的10