遗传性凝血因子Ⅶ与Ⅹ联合缺陷症的分子发病机制研究

• 作 者: 金艳慧 郑加永 杨丽红 程晓丽 王明山
• 机 构: 325000 温州医科大学附属第一医院医学检验中心,325000 温州医科大学附属第一医院医学检验中心,325000 温州医科大学附属第一医院医学检验中心,325000 温州医科大学附属第一医院医学检
• 出 处: 中华检验医学杂志
• 发表日期: 2018年41期
• 关键词: 因子Ⅶ缺乏 因子Ⅹ缺乏 血液凝集障碍 突变 多态现象 遗传

目的

对1个遗传性凝血因子Ⅶ(FⅦ)与因子Ⅹ(FⅩ)联合缺陷症患者进行表型及F7与F10基因突变检测，探讨其分子发病机制。

方法

2016年7月12日温州医科大学附属第一医院妇科门诊收治1例48岁子宫肌瘤患者。采集先证者及其家系成员(共3代8人)外周静脉血标本，采用一期凝固法检测其凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、血浆FⅦ活性(FⅦ：C)、FⅩ活性(FⅩ：C)等凝血指标，ELISA法检测FⅦ抗原(FⅦ：Ag)和FⅩ抗原(FⅩ：Ag)；用DNA直接测序法分析先证者F7、F10基因的全部外显子、侧翼、5′和3′非翻译区及家系成员相应的突变位点区域，用反向测序证实所发生的突变；采用生物信息学预测软件(SIFT和PolyPhen－2)分析突变对蛋白质功能的影响；以蛋白质数据库(Protein Data Bank)中提供的三维结构(PDB ID：FⅦ，1dan；FⅩ，1xka)为模型，用Swiss－pdbViewer软件程序分析突变位点对FⅦ及FⅩ蛋白分子内氨基酸相互作用的影响。

结果

先证者的PT(17.2 s)和APTT(52.4 s)延长，FⅦ：C、FⅦ：Ag与FⅩ：C、FⅩ：Ag下降，分别为42%、55%与35%、43%；母亲、女儿的FⅩ：C分别为40%和42%及FⅩ：Ag分别为43%和47%；父亲、大哥的FⅦ：C、FⅦ：Ag均下降至正常对照的一半左右。测序发现先证者的F7基因第8外显子的c.1238G>A杂合突变导致Arg353Gln多态性，F10基因第4外显子的c.361T>C杂合突变导致Cys81Arg错义突变；父亲、大哥存在F7基因的Arg353Gln多态性及母亲、女儿存在F10基因Cys81Arg错义突变。生物信息学软件预测结果表明Cys81Arg错义突变可影响蛋白质的功能。蛋白模型分析发现：FⅩ蛋白第81位不带电荷的Cys被带正电荷的Arg取代后，其Cys81与Cys72间的二硫键消失，并且产生空间位阻效应；FⅦ蛋白第353位带正电荷的Arg被不带电荷的Gln取代后，Arg353与Tyr352间的氢键消失。

结论

该遗传性凝血因子Ⅶ与Ⅹ联合缺陷症家系先证者的F7基因存在Arg353Gln多态性及F10基因存在Cys81Arg杂合错义突变，且分别遗传自父亲和母亲。F10基因Cys81Arg为国际上鲜见报道的突变，其和F7基因Arg353Gln多态性与该家系的FⅩ和FⅦ水平降低有关。(中华检验医学杂志，2018, 41：66－69)