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目的
构建与鉴定联合调控降钙素基因相关肽(CGRP)和过氧化物酶体增殖子活化受体-γ(PPARγ)基因的重组载体。
方法将CGRP基因完整ORF克隆，设计其两端带MluI酶切位点，与TGFP融合蛋白表达单元间用一段柔性链连接，CGRP基因ORF cDNA纯化后与线性化pGFP-V-RS载体连接；按照siRNA的设计原则，设计靶向PPARγ的siRNA寡核苷酸靶序列，将发卡样siRNA寡核苷酸靶序列退火后克隆入线性化pGFP-V-RS载体；再在此载体中克隆入CGRP ORF cDNA片段。进而将此3个质粒做酶切及测序鉴定。
结果表达CGRP基因的pGFP-V-RS-exCGRP、沉默PPARγ基因表达的pGFP-V-RS-siPPARγ和表达CGRP且同时沉默PPARγ的pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP，经酶切及测序鉴定的结果与设计均完全一致。
结论成功构建出联合调控CGRP表达和沉默PPARγ的双基因重组载体。