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背景:常用的获得软骨细胞的方法有机械-酶消化法、链霉蛋白酶和胶原酶序贯消化法、胰蛋白酶和Ⅱ型胶原蛋白酶序贯消化法以及单纯Ⅱ型胶原蛋白酶消化法。目的:探讨SD大鼠膝关节软骨细胞Ⅱ型胶原酶体外分离、提取、鉴定方法,观察原代至第3代软骨细胞的形态学特点。方法:课题组采用一步酶消化法(Ⅱ型胶原酶)体外分离、提取、培养SD大鼠膝关节软骨细胞并进行传代培养,进而构建其体外培养体系。使用细胞增殖实验、倒置相差显微镜观察细胞组织学形态;甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原与蛋白聚糖免疫荧光染色等方法进行细胞性状鉴定。实验经大连大学附属