【摘 要】
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目的 观察黄芩清热除痹胶囊(HQC)含药血清对痛风性关节炎(GA)CD4+T细胞与心肌细胞共培养后miR-23a-3p/PTEN表达的影响.方法 抽取GA患者外周血提取CD4+T细胞,购买心肌细胞,用
【机 构】
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安徽中医药大学第一附属医院 安徽 210031
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目的 观察黄芩清热除痹胶囊(HQC)含药血清对痛风性关节炎(GA)CD4+T细胞与心肌细胞共培养后miR-23a-3p/PTEN表达的影响.方法 抽取GA患者外周血提取CD4+T细胞,购买心肌细胞,用尿酸钠结晶培养液刺激心肌细胞模拟GA患者病理状态心肌细胞,进行细胞分离和细胞共培养.正常组为正常心肌细胞,对照组为模拟病理状态心肌细胞和正常CD4+T细胞,模型组为模拟病理状态心肌细胞和GA患者CD4+T细胞,一部分模型组再分为含药血清组(加入含药血清)、miR mimic 组(miR-23a-3p mimic 稳定转染)、miR NC 组[miR-23a-3p mimic 阴性对照(miR-23a-3p NC)稳定转染]、含药血清miR mimic组(miR-23a-3p mimic稳定转染,加入含药血清).CCK-8检测不同体积分数含药血清下细胞增殖数量,免疫荧光观察心肌特异性标志物,Western blot法检测PTEN蛋白表达,RT-qPCR检测PTEN基因表达.结果 HQC含药血清的体积分数为20％时其促进细胞增殖的作用最为明显.HQC改善心肌细胞的超微结构与模型组比较,免疫荧光显示miR mimic组心肌细胞B型钠尿肽(BNP)、连接蛋白43(Connexin 43)荧光斑荧光增强的现象最强烈,在心肌细胞内的分布变得紊乱.而正常组及对照组心肌细胞有荧光减弱甚至缺失的现象,含药血清组及含药血清miR mimic组在加药后与模型组及miR mimic组的各自比较荧光斑荧光明显减少.HQC提高心肌细胞PTEN蛋白水平,过表达miRNA-23a-3p后,HQC同样可以不同程度提高PTEN蛋白水平.HQC提高心肌细胞PTEN mRNA水平(P＜0.01).结论 HQC通过抑制miR-23a-3p,从而上调PTEN,抑制心肌细胞生长和炎症反应.
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