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【摘要】 目的 观察灵芝孢子粉对2型糖尿病大鼠睾丸IL-1β、TNF-α的影响。方法 Wistar雄性大鼠50 只，随机分成3组(正常组、模型组、灵芝组)。采用放免法检测睾丸IL-1β、TNF-α的含量。结果 糖尿病组与正常对照组比较，IL-1β、TNF-α含量明显高于对照组(P<0.05)。而灵芝组与糖尿病组比较，IL-1β、TNF-α含量明显低于糖尿病组(P<0.05)。结论 灵芝孢子粉能有效降低IL-1β、TNF-α对糖尿病大鼠生殖系统的毒性损害，对糖尿病大鼠生殖系统的细胞凋亡有明显抑制，从而是对睾丸细胞起保护作用的机制之一。灵芝孢子粉作为一种治疗糖尿病的辅助用药，在临床应用上具有广阔前景。
【关键词】 2型糖尿病；睾丸；IL-1β；TNF-α；灵芝孢子粉
Ganoderma lucidum spre powder on type 2 diabetes rat testis IL-1β，TNF-α expressioninfluence
ZHONG Li-li,ZHANG Wei-jia，YIN Li-ying,et al.
Harbin City, Heilongjiang Province First Affiliated Hospital of the University of Chinese Medicine, Harbin 150040,China
【Abstract】 Objective To observe ganoderma lucidum spore powder perishes weakly on type 2 diabetes big mouse testis cell IL-1β、TNF-α expression influence. Methods 50 Wistar big mouse randomly were divided into 3 groups control group, diabetes group, ganoderma lucidum group. Radioimmunoassay examines testis cell factor IL-1β、TNF-α levels.Results Diabetes group and the normal control group, IL-1β and TNF-α were significantly higher(P<0.05). The ganoderma lucidum group and diabetes group，IL-1β、TNF-α levels significantly lower than diabetes group(P<0.05). Conclusion The ganoderma lucidum spore can effectively reduce the IL-1β, TNF-α levels in diabetes rats toxic damage to the reproductive system,probably in diabetes rats reproductive system of apoptosis significantly inhibition of testicular cells so protective effect from one of the mechanisms. Ganoderma lucidum spore as a complementary treatment of diabetes treatment in clinical applications, has broad prospects.
【Key words】 Type 2 diabetes； Testis； Interleukin(IL-1β)；Tumor necrosis factor-alpha(TNF-α)；Ganoderma lucidum spore powder
糖尿病伴性功能与生殖功能障碍无论在人还是在实验动物都有报道,发病率高达35%~75%,严重影响了患者的生活质量,甚至不育,其发病机制仍未完全阐明。为探讨细胞因子在糖尿病大鼠睾丸损伤中的作用,我们通过检测糖尿病大鼠睾丸IL-1β、TNF-α含量的变化,来观察糖尿病大鼠睾丸细胞因子水平,为阐明糖尿病性与生殖功能障碍的机制奠定基础。灵芝孢子粉对糖尿病大鼠睾丸具有保护作用,从而提高性与生殖功能。
1 材料与方法
1.1 药品与试剂
链脲佐菌素（STZ）为北京拜尔迪生物技术有限公司产品；IL-1β、TNF-α放免分析试剂盒为北京北方福瑞放免研究所产品；灵芝孢子粉为佳木斯灵芝养殖厂产品。
1.2 方法
1.2.1 2型糖尿病大鼠模型的建立及分组 雄性Wistar大鼠50只，随机分为三组。模型组及灵芝组大鼠经尾静脉一次性按25 mg/kg注射2%链脲佐菌素（STZ），正常组尾静脉注射等量柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液。正常饮食喂养2周后，进行糖耐量试验，模型组和灵芝组以糖耐量异常者保留，其余去除。模型组改喂高脂高糖饮食，灵芝组另加灵芝孢子粉250 mg（kg•d）持续10周。实验结束前1 d做血糖试验［1］,取双侧睾丸检测相关指标。
1.2.2 血清葡萄糖浓度的测定 应用血糖试纸进行检测第一周及第十二周大鼠尾静脉血糖值。
1.2.3 IL-1β、TNF-α的测定 采用放免法
1.2.4 统计学处理
所有数据以均数±标准差(x±s)表示，阳性率的比较采用SPSS 11.5软件进行检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 血糖变化
实验开始，糖尿病组及灵芝组大鼠血糖升高(P<0.05)，实验12周糖尿病组血糖显著升高(P<0.05)，灵芝组血糖降低(P>0.05)。
2.2 睾丸组织TNF-α、IL-1β含量变化 实验结束时测定大鼠睾丸TNF-α、IL-1β含量，结果显示，模型组高于正常组，差异有统计学意义(P<0.05)，而灵芝组低于模型组，差异有统计学意义(P<0.05)。
3 讨论
TNF-α含量升高可以作为旁分泌因子直接作用于睾丸，导致睾丸间质细胞和支持细胞功能紊乱从而间接导致精子细胞生成、维持、成熟受损。Buch研究进一步表明1L-1和TNF能通过激发人精子活性氧的产生导致正常男性精子膜脂质穿孔，从而使精子功能受损［2］，随着TNF-α 、IL-1β的升高，精子活力显著降低。特别是向前快速直线运动能力，从而减少精子受精机会［3］。而灵芝组TNF-α、IL-1β含量低于模型组，由此推测灵芝孢子粉对生殖功能的改善作用很可能是抑制TNF-α 、IL-1β活性，减少其含量促使糖尿病时生殖活动的调节恢复。
综上所述，灵芝孢子粉具有降糖作用、抗炎作用和清除自由基作用等功能［4］。灵芝孢子粉能减少糖尿病所致的睾丸细胞凋亡，从而对睾丸细胞起到保护作用，提高性与生殖功能。
参考文献
［1］ 张均田.现代药理实验方法.北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，2000：1228-1229.
［2］ 傅强.男性生殖系统的组织工程学运用.中国男性学报,1993:3(13):149-150.
［3］ 陈俊汇,杨为民,李家贵.男性不育患者精浆内细胞因子研究.中国男科学杂志,1999:3(13):144-145.
［4］ 刘虹，周甄鸿，刘志宏. 灵芝孢子粉药理作用研究进展.天津中医学院学报，2002，21（4）：50-51.
【关键词】 2型糖尿病；睾丸；IL-1β；TNF-α；灵芝孢子粉
Ganoderma lucidum spre powder on type 2 diabetes rat testis IL-1β，TNF-α expressioninfluence
ZHONG Li-li,ZHANG Wei-jia，YIN Li-ying,et al.
Harbin City, Heilongjiang Province First Affiliated Hospital of the University of Chinese Medicine, Harbin 150040,China
【Abstract】 Objective To observe ganoderma lucidum spore powder perishes weakly on type 2 diabetes big mouse testis cell IL-1β、TNF-α expression influence. Methods 50 Wistar big mouse randomly were divided into 3 groups control group, diabetes group, ganoderma lucidum group. Radioimmunoassay examines testis cell factor IL-1β、TNF-α levels.Results Diabetes group and the normal control group, IL-1β and TNF-α were significantly higher(P<0.05). The ganoderma lucidum group and diabetes group，IL-1β、TNF-α levels significantly lower than diabetes group(P<0.05). Conclusion The ganoderma lucidum spore can effectively reduce the IL-1β, TNF-α levels in diabetes rats toxic damage to the reproductive system,probably in diabetes rats reproductive system of apoptosis significantly inhibition of testicular cells so protective effect from one of the mechanisms. Ganoderma lucidum spore as a complementary treatment of diabetes treatment in clinical applications, has broad prospects.
【Key words】 Type 2 diabetes； Testis； Interleukin(IL-1β)；Tumor necrosis factor-alpha(TNF-α)；Ganoderma lucidum spore powder
糖尿病伴性功能与生殖功能障碍无论在人还是在实验动物都有报道,发病率高达35%~75%,严重影响了患者的生活质量,甚至不育,其发病机制仍未完全阐明。为探讨细胞因子在糖尿病大鼠睾丸损伤中的作用,我们通过检测糖尿病大鼠睾丸IL-1β、TNF-α含量的变化,来观察糖尿病大鼠睾丸细胞因子水平,为阐明糖尿病性与生殖功能障碍的机制奠定基础。灵芝孢子粉对糖尿病大鼠睾丸具有保护作用,从而提高性与生殖功能。
1 材料与方法
1.1 药品与试剂
链脲佐菌素（STZ）为北京拜尔迪生物技术有限公司产品；IL-1β、TNF-α放免分析试剂盒为北京北方福瑞放免研究所产品；灵芝孢子粉为佳木斯灵芝养殖厂产品。
1.2 方法
1.2.1 2型糖尿病大鼠模型的建立及分组 雄性Wistar大鼠50只，随机分为三组。模型组及灵芝组大鼠经尾静脉一次性按25 mg/kg注射2%链脲佐菌素（STZ），正常组尾静脉注射等量柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液。正常饮食喂养2周后，进行糖耐量试验，模型组和灵芝组以糖耐量异常者保留，其余去除。模型组改喂高脂高糖饮食，灵芝组另加灵芝孢子粉250 mg（kg•d）持续10周。实验结束前1 d做血糖试验［1］,取双侧睾丸检测相关指标。
1.2.2 血清葡萄糖浓度的测定 应用血糖试纸进行检测第一周及第十二周大鼠尾静脉血糖值。
1.2.3 IL-1β、TNF-α的测定 采用放免法
1.2.4 统计学处理
所有数据以均数±标准差(x±s)表示，阳性率的比较采用SPSS 11.5软件进行检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 血糖变化
实验开始，糖尿病组及灵芝组大鼠血糖升高(P<0.05)，实验12周糖尿病组血糖显著升高(P<0.05)，灵芝组血糖降低(P>0.05)。
2.2 睾丸组织TNF-α、IL-1β含量变化 实验结束时测定大鼠睾丸TNF-α、IL-1β含量，结果显示，模型组高于正常组，差异有统计学意义(P<0.05)，而灵芝组低于模型组，差异有统计学意义(P<0.05)。
3 讨论
TNF-α含量升高可以作为旁分泌因子直接作用于睾丸，导致睾丸间质细胞和支持细胞功能紊乱从而间接导致精子细胞生成、维持、成熟受损。Buch研究进一步表明1L-1和TNF能通过激发人精子活性氧的产生导致正常男性精子膜脂质穿孔，从而使精子功能受损［2］，随着TNF-α 、IL-1β的升高，精子活力显著降低。特别是向前快速直线运动能力，从而减少精子受精机会［3］。而灵芝组TNF-α、IL-1β含量低于模型组，由此推测灵芝孢子粉对生殖功能的改善作用很可能是抑制TNF-α 、IL-1β活性，减少其含量促使糖尿病时生殖活动的调节恢复。
综上所述，灵芝孢子粉具有降糖作用、抗炎作用和清除自由基作用等功能［4］。灵芝孢子粉能减少糖尿病所致的睾丸细胞凋亡，从而对睾丸细胞起到保护作用，提高性与生殖功能。
参考文献
［1］ 张均田.现代药理实验方法.北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，2000：1228-1229.
［2］ 傅强.男性生殖系统的组织工程学运用.中国男性学报,1993:3(13):149-150.
［3］ 陈俊汇,杨为民,李家贵.男性不育患者精浆内细胞因子研究.中国男科学杂志,1999:3(13):144-145.
［4］ 刘虹，周甄鸿，刘志宏. 灵芝孢子粉药理作用研究进展.天津中医学院学报，2002，21（4）：50-51.