【摘 要】
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目的分离、鉴定小细胞肺癌(SCLC)患者血清中外泌体,探讨外泌体内信使RNA(mRNA)和长链非编码RNA(lncRNA)表达谱。方法利用Exo RNeasy试剂盒分离5例SCLC患者血清外泌体,采用电
【机 构】
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广州医科大学公共卫生学院,广州市第一人民医院呼吸内科
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(编号:81402753,81672303);广东省教育厅特色创新项目(编号:2015KTSCX116);广州市科技计划项目珠江科技新星专项(编号:201710010049)
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目的分离、鉴定小细胞肺癌(SCLC)患者血清中外泌体,探讨外泌体内信使RNA(mRNA)和长链非编码RNA(lncRNA)表达谱。方法利用Exo RNeasy试剂盒分离5例SCLC患者血清外泌体,采用电镜、粒径分析、CD63和CD68两个表面标志物检测鉴定外泌体,提取RNA后,应用二代测序技术进行1例样本的转录组测序,分析mRNA和lncRNA表达谱,并在4例SCLC中采用实时荧光定量PCR验证测序结果。结果电镜下可见大小均一,形态呈杯口状颗粒,粒径在40~130 nm间,CD63和CD81表达均呈阳性,与外泌体特征吻合。转录组测序共检测出1 822个mRNA和890个lncRNA分子,其中表达丰度最高的mRNA依次为血红蛋白β链、血红蛋白A2和多角体蛋白促进因子结合蛋白,lncRNA依次为ARHGEF26-AS1、WARS2-IT1和DARS-AS1。进一步在其余样本中检测上述lncRNAs,发现其阳性表达率分别为75%、100%和50%,表明RNA-seq结果基本可靠。结论经过形态、粒径大小及特征蛋白分析证实SCLC血清外泌体的存在,其内可检测到大量的mRNA和lncRNA分子,为深入探讨SCLC外泌体内RNA分子的临床应用提供基础数据。
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