【摘 要】
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[目的]鉴定中华眼镜蛇 (Naja naja atra)蛇毒中的神经保护因子,研究其抗神经元凋亡作用机制.[方法]连续柱层析法分离、纯化蛇毒神经保护因子.用 Edman N 末端测序法取得蛋白
【机 构】
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中山大学中山医学院,香港科技大学生物化学教研室,斯洛文尼亚约泽夫斯特凡学院生化及分子生物学系
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[目的]鉴定中华眼镜蛇 (Naja naja atra)蛇毒中的神经保护因子,研究其抗神经元凋亡作用机制.[方法]连续柱层析法分离、纯化蛇毒神经保护因子.用 Edman N 末端测序法取得蛋白质一级序列, BLAST软件进行蛋白质鉴定.使用低钾诱导体外培养小脑颗粒神经元凋亡模型,研究其神经元保护作用.[结果]从中华眼镜蛇蛇毒中分离出一种 , 可浓度依赖性地抑制低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡.神经保护因子 (Cobra venom neuronal protective factor, CVNPF)此神经保护因子 N 末端 20个氨基酸序列为 NLYQFKNMIQCTVPSRSWWD , BLAST序列同源比对确定该保护因子为中华眼镜蛇分泌型磷脂酶 A2(secreted phospholipase A2, sPLA2).进一步发现来源于蜂毒、莫桑比克眼镜蛇 (Njaja naja mossambica)蛇毒、西部菱斑响尾蛇 (Crotalus atroxalso)蛇毒的 sPLA2也对小脑颗粒神经元具有保护作用;其作用不为磷脂酶 A2酶活性抑制剂 7,7-Dimethyleicosadienoic acid (DEDA) 和 Manoalide阻断.[结论]CVNPF属于 sPLA2.多种 sPLA2可以抗神经元凋亡,其保护机制与磷脂酶 A2的酶活性无关.
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